研究課題
基盤研究(C)
我々は、トランスサイレチン(TTR)のN末端から10番目のシステイン(Cys)に亜硫酸が結合した構造、および、このCysがグリシンに変化した構造を見出した。この反応を調べるため、市販の精製TTR及びTTRのシステイン周辺のアミノ酸配列に相当するペプチドSKCPLMVKを弱アルカリ性でインキュベートし、LC/ESI-MSで分析した。その結果、TTR中のCysがSS結合を形成した後、β脱離によって、グリシン、デヒドロアラニン、亜硫酸Cysなどに変化すると考えられる成分を認めた。LC/ESI-MS/MSによる分析を詳細に記載した。インキュベート後の試料を、加水分解し、アミノ酸分析を行ったところ、グリシンの収量は悪かった。質量数が同じ異性体に変化している可能性も否定できない。ランチオニン等の架橋アミノ酸の証明もできなかった。より詳細なアミノ酸分析が必要である。さらに、精製TTR、正常血清TTR、の構造変化を、SDS-PAGE、及びMALDI-TOFMSで調べた。精製TTRは還元変性条件下でSDS-PAGEで解析した結果、モノマーに加え、ダイマー及び60kDa、45kDa、28kDa、20kDaの複数のバンドを検出した。血清TTRでは、これに加え、55kDaにバンドを認めた。還元変性条件下のSDS-PAGEで、ポリマーは、10%以上認められるが、MALDI-TOFMS分析ではモノマーのみ検出された。MALDIの溶媒は強酸性(0.1%トリフルオロ酢酸)であり、SDSは入っていない。TTRはSDS、尿素などの変性条件下で、非共有結合によるポリマーを形成し易いと考える。β脱離によりデヒドロアラニンを含むTTRが生じ易いことと、変性条件化で非共有結合ポリマー形成しやすいことと、アミロイド形成傾向が関連している可能性があり、なお今後の課題である。
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