| 研究課題/領域番号 |
16590942
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
血液内科学
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| 研究機関 | 愛媛大学 |
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研究代表者 |
羽藤 高明 愛媛大学, 医学部附属病院, 講師 (30172943)
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| 研究分担者 |
安川 正貴 愛媛大学, 医学部, 教授 (60127917)
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| 研究期間 (年度) |
2004 – 2005
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| 研究課題ステータス |
完了 (2005年度)
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| 配分額 *注記 |
3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
2005年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
2004年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
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| キーワード | 血小板 / 特発性血小板減少性紫斑病 / GPIIb-IIIa / T細胞 / 自己免疫 / インテグリン / エピトープ |
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| 研究概要 |
本研究の目的は、ITP患者からGPIIbペプチドに反応するT細胞クローンを分離し、ITPにおけるGPIIb反応性T細胞の役割とドミナントエピトープを明らかにすることである。われわれは、ITP患者からGPIIb由来ペプチド(#429-443)を特異的に認識するHLA-DR^*0405拘束性CD4陽性T細胞株を樹立した。このT細胞は血小板を自己樹状細胞に取り込ませて抗原提示させた系においても細胞増殖反応とサイトカイン産生を示したことから、GPIIb#429-443が自己反応性T細胞エピトープとなりうることを証明した。この手法を用いて複数のITP患者からGPIIb反応性T細胞を分離することができた。また、ヘルパー活性を評価するために必要となる抗GPIIb抗体産生量の測定法として、抗GPIIb-IIIaモノクローナル抗体を用いた高感度ELISA測定系を確立した。ついで、GPIIb反応性T細胞の機能解析を行ったところ、ヘルパー活性を有するCD4陽性T細胞だけでなく、一部のITP患者には細胞障害活性を有するGPIIb反応性CD8陽性T細胞が存在していた。また、GPIIb-IIIaの機能解析を遺伝子組み換え蛋白を用いてすすめた結果、リガンド結合に重要なアミノ酸とGPIIb-IIIaの活性化を抑制しているアミノ酸配列を同定した。また、CD4陽性T細胞の機能解析のために、WT1に対するCD4陽性T細胞クローンを樹立して、その機能を解析したところ、このクローンはHLAクラスII抗原拘束性にWT1陽性白血病細胞に対して細胞障害活性を示した。また、CD4陽性T細胞とCD8陽性T細胞のパーフォリン遺伝子の発現を比較したところ、CD8陽性T細胞ではパーフォリン遺伝子の恒常的発現がみられるのに対して、CD4陽性T細胞では細胞の活性化依存性に発現することが明らかになった。
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