| 研究課題/領域番号 |
16590963
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
血液内科学
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| 研究機関 | 慶應義塾大学 |
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研究代表者 |
半田 誠 慶應義塾大学, 医学部, 助教授 (40129614)
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| 研究分担者 |
横山 健次 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (70230662)
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| 研究期間 (年度) |
2004 – 2005
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| 研究課題ステータス |
完了 (2005年度)
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| 配分額 *注記 |
3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
2005年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
2004年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
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| キーワード | イノシトールリン脂質3キナーゼ / Bruton tyrosine kinase / 血小板 / コラーゲン / フォスフォリパーゼγ2 / GPVI / 遺伝子ノックアウトマウス / 抗血小板療法 / LAT / 分子ノックアウト |
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| 研究概要 |
クラス1イノシトールリン脂質3キナーゼ(PI3K)は主に細胞内の種々の蛋白キナーゼの活性を調節することで、血小板機能に深く係わっている。wortmanninなどのPI3K阻害剤によるin vitro血小板機能抑制効果が示されていたが、本来的に特異性に問題があった。PI3K経路が抗血小板治療の標的となるか否かを追求する目的で、関連分子の遺伝子ノックアウトマウスを用いることで、この酵素が支配する伝達経路が血小板機能にどのよ;うに関与しているかを解析した。平成16年度には、.血小板血栓のトリガーとして生理的に重要なコラーゲンにより惹起される血小板の細胞反応は、従来考えられたPl3K依存性経路とともに非依存性の経路を介することを明らかにした。そして、両経路にBtkが律速酵素として関与し、抗血小板療法の標的としてBtkが有望な分子であることが示した。
平成17年度、Pl3K非依存性のBtk活性化機構の存在をより明確に示す目的で、Pl3K/Btkダブルノックアウト(Pl3K(-/-)/Btk(-/-))マウスのex vivo血小板機能を解析し、
1)コラーゲンもしくは関連ペプチドCRPに対する血小板凝集能、活性化反応(p一セレクチン発現、フィブリノゲン結合能)、血栓形成(接着)動態、フォスフォリパーゼ(PLC)γ2の蛋白チロシンリン酸化反応は、Pl3K(-/-)/Btk(-/-)血小板において、それぞれの分子単独欠損血小板に比して、相加的に著しく低下すること、2)Pl3K(-/-)血小板において、CRP刺激によりBtkは十分リン酸化を受けるとともに、コラーゲン受容体GPVIの直下に位置するLAT/Gads/SLP76アダプター複合体と共沈することを示した。
以上から、血小板血栓のトリガーとして生理的に重要なコラーゲンにより惹起される血小板の細胞反応は、従来考えられたPl3K依存性経路とともに非依存性の経路を介することが証明された。抗血小板療法の標的としてBtkが有望な分子であることを明らかにした。
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