| 研究課題/領域番号 |
16591036
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
小児科学
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| 研究機関 | 高知大学 |
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研究代表者 |
脇口 宏 高知大学, 医学部, 教授 (10116519)
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| 研究分担者 |
前田 明彦 高知大学, 医学部, 助手 (50335931)
黒田 正幸 高知大学, 医学部, 助手 (00253005)
今井 章介 高知大学, 医学部, 教授 (60232592)
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| 研究期間 (年度) |
2004 – 2005
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| 研究課題ステータス |
完了 (2005年度)
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| 配分額 *注記 |
3,600千円 (直接経費: 3,600千円)
2005年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
2004年度: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
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| キーワード | EBウイルス(EBV) / 慢性活動性EBV感染症 / dominant-negative EBNA1 / 遺伝子治療 / EBV陽性腫瘍 |
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| 研究概要 |
慢性活動性EBウイルス(EBV)感染症は小児に多い予後不良疾患であり、その本態はEBV感染TあるいはNK細胞の腫瘍性増殖である。しかし本症の有効治療法はいまだ確立されていない。当研究では、本症に対する新たな治療戦略の確立を目指し、感染細胞内でのEBVゲノム(エピゾーム)の複製・維持に必須なウイルスタンパクであるEBNA1に対するドミナント・ネガティブ変異体(DNE1)を独自に作製、これがEBV陽性T、NK細胞からのEBVゲノム脱落、ならびに細胞無制限増殖を阻害するかどうかを検討し、以下の知見を得た。
1.作製したEBNA1変異体を人為的EBV陽性変換細胞株(リンパ球系、上皮細胞系)、EBV陽性バーキットリンパ腫(BL)細胞株に導入発現させた結果、効率的EBVエピゾーム駆逐に機能するDNE1であることをin vitro、in vivoで確認した。
2.このDNE1が、慢性活動性EBV感染症や鼻性T/NKリンパ腫由来のEBV持続感染T、NK細胞株に対しても、BL細胞の場合と同様にウイルスゲノムを追い出し、同時に感染細胞の悪性増殖形質も抑制することを見い出した。細胞株によってはEBVゲノムの脱落が生ずる以前の、DNE1発現早期にすでに有意なアポトーシス誘導が認められた。
3.DNE1の抗EBV効果は野生型(wt)EBNA1のoriP結合に対する競合阻害だけでなく、wtEBNA1転写プロモーター(Qp)近傍に結合してQp活性を負に制御してwtEBNA1の新規生成を抑制し、さらにwtEBNA1分子とヘテロ2量体を形成、結果としてwtEBNA1を枯渇させるという複数機序によることを見い出した。
以上の成績を総合し、我々のDNE1が慢性活動性EBV感染症をはじめとする難治性EBV関連腫瘍性疾患に対して治療学的汎用性を有する新規の特異的遺伝子治療用分子となる可能性が強く示された。
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