| 研究概要 |
耳下腺腺房細胞では,β-アドレナリン受容体刺激により細胞内cAMP濃度が上昇し,その結果アミラーゼの開口放出が引き起こされる。我々は,刺激依存性アミラーゼ分泌の分子機構について研究を進めており,分泌顆粒上に存在するタンパク質であるVAMP2が必須であることを見いだしている。しかし,現在までのところ耳下腺腺房細胞では,刺激依存性分泌能および分泌顆粒を維持している培養細胞は確立しておらず,そのことが分子遺伝学的な解析を妨げてきた。我々は本研究において,耳下腺腺房細胞の初代培養細胞系を確立し,外来遺伝子の導入を行った。この培養系では,腺房細胞に特徴的な活性である刺激依存性アミラーゼ分泌能および分泌穎粒形成能を維持していた。さらに,GFP-VAMP2が分泌穎粒に観察されることから,タンパク質のソーティングも性状に行われていると考えられた。この系を用いることによって,腺房細胞の機能について解析することが可能になった。さらに,我々は耳下腺から分泌顆粒を精製し,密度勾配遠心により分泌顆粒を分画することによって,未成熟の分泌顆粒と成熟顆粒に分けることに成功した。未成熟分泌顆粒上にはsyntaxin6が多く存在しており,成熟顆粒には刺激依存性分泌に必要なVAMP2が濃縮していることを見いだしている。syntaxin6は一度分泌顆粒へ組み込まれた後,分泌顆粒上でソーティングを受け,early ecndosomeへ輸送されると考えられる。このように,分泌顆粒は一度形成された後に膜の融合と出芽により成熟し,刺激依存性開口放出に必要な因子を獲得することが明らかになった。
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