| 研究課題/領域番号 |
16659565
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| 研究種目 |
萌芽研究
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
外科系歯学
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| 研究機関 | 松本歯科大学 |
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研究代表者 |
古澤 清文 (2005) 松本歯科大学, 大学院歯学独立研究科, 教授 (90165481)
橋本 雅幸 (2004) 松本歯科大学, 歯学部, 助手 (10367518)
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| 研究分担者 |
上松 隆司 松本歯科大学, 大学院歯学独立研究科, 助教授 (40203476)
堂東 亮輔 松本歯科大学, 歯学部, 助手 (40329470)
古澤 清文 松本歯科大学, 大学院・歯学独立研究科, 教授 (90165481)
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| 研究期間 (年度) |
2004 – 2005
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| 研究課題ステータス |
完了 (2005年度)
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| 配分額 *注記 |
3,200千円 (直接経費: 3,200千円)
2005年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
2004年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
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| キーワード | 頭頸部癌 / ヘリカーゼ / 酵素 / RNAヘリカーゼ / クローニング / cDNAライブラリー |
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| 研究概要 |
【目的】本年度の研究では、分離された頭頸部癌培養細胞から抽出した蛋白に対するポリクローナル抗体を作成し、遺伝子クローニングを行った。
【方法】以下の方法で行った.
1.頭頸部癌培養細胞から抽出したα-N-acetylgalactosaminidase活性を示す蛋白を抗原とし、ウサギを宿主としてポリクローナル抗体を作製した。
2.頭頸部癌のHela細胞より抽出したmRNAを抽出し、1^<st> strand cDNAを調製後、UNIZAP XR VECTORに挿入してcDNAベクターライブラリーを作製した。ファージベクターのホストとしてXL-1 Blueを用いた。
3.XL-1 Blueを用いてファージタイターは2.4×10^<12>Pfu/mlで、このファージライブラリーを用いてクローニングを行った。
4.IPTGを添加したNZY平板培地に、ファージを吸着させたXL-1 Blueをまき、42℃の温度シフト後に形成されたプラークをブロッティング膜に転写させた。作製したポリクローナル抗体を用いてECL法によってクローンを検出した。
【結果】Hela細胞より抽出した、約2500塩基のリーディングフレームを持つ新規mRNAをクローニングした。本蛋白は、DEVD Boxを有し、N末端側に塩基性アミノ酸配列と核移行シグナルが、またC末端側には回文構造がみられた。NCBIのBlastnによる解析では、RNAヘリカーゼ様構造を持つとともに、α-ガラクトシダーゼやグルクロニダーゼとの相同性もみられ、糖鎖構造を脱糖鎖する機能を有すると考えられた。
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