| 研究課題/領域番号 |
16770136
|
|---|
| 研究種目 |
若手研究(B)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 研究分野 |
分子生物学
|
|---|
| 研究機関 | 東京工業大学 |
|---|
研究代表者 |
坂東 優篤 東京工業大学, バイオ研究基盤支援総合センター, 助手 (90360627)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2004 – 2005
|
| 研究課題ステータス |
完了 (2005年度)
|
| 配分額 *注記 |
2,500千円 (直接経費: 2,500千円)
2005年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
2004年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
|
|---|
| キーワード | Mrc1 / Tof1 / 複製フォーク / チェックポイント / 安定化 / DNA複製 |
|---|
| 研究概要 |
Mrc1及びTof1は、出芽酵母においてS期での複製フォークの構成因子の一つで、複製チェックポイント因子として機能をもつことが知られている。前年度までにMrc1、Tof1に加え、新たにCsm3が、複製チェックポイント活性化時での複製フォーク進行の安定な停止に機能することと、これら3因子はin vivoで複合体を形成している可能性を示した。そこで、Mrc1、Tof1及びCsm3の組換えバキュロウイルスを作製し、それぞれのウイルスを感染させた昆虫細胞を用いて、組換えたんぱく質を発現、精製したところ、Mrc1、Tof1及びCsm3は、それぞれ相互作用し、複合体を形成することが明らかとなった。さらに、この複合体の詳細な機能や活性について解析を行なったところ、Tof1のN末側に複合体の形成やチェックポイントの活性化(Rad53のリン酸化)に必要なドメインが存在することやTof1自身がMrc1を介してRad53によりリン酸化されること、Tof1/Csm3複合体と相互作用する因子としてMcm2、Mcm3やDNAポリメラーゼalphaと相互作用するCtf4やDNA修復や再複製に関与するDpb11やChl1を見出した。また、Mrc1は、C末側に、Mcm6、Mcm7やMcm10と結合する領域、N末側にRad53の活性化に必要な領域が存在することを明らかにした。これらの結果から、Mrc1/Tof1/Csm3複合体は、チェックポイント活性化時にヘリカーゼを含む複製フォーク構成因子を制御し、複製フォーク進行の安定な停止させる機能を持つことに加え、さらにDNA修復や修復後の再複製に機能する可能性が考えられる。
|
