| 研究課題/領域番号 |
16770150
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| 研究種目 |
若手研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
細胞生物学
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
熊谷 孝則 広島大学, 大学院医歯薬学総合研究科, 助教授 (70274058)
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| 研究期間 (年度) |
2004 – 2005
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| 研究課題ステータス |
完了 (2005年度)
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| 配分額 *注記 |
3,100千円 (直接経費: 3,100千円)
2005年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
2004年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
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| キーワード | 放線菌 / シグナル伝達 / チロシンリン酸化 / 2D-PAGE / 免疫沈降 / MS / MS解析 / Walkerモチーフ / 金属クロマトグラフィー |
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| 研究概要 |
放線菌において、タンパク質のチロシン残基を介したシグナル伝達機構はほとんど明らかになっていない。本研究では、放線菌Streptomyces (S.) coelicolor A3(2)に存在するチロシンリン酸化タンパク質を同定し、それらタンパク質がどのように形態分化や抗生物質生産の制御に関わっているか明らかにすることを目的とした。
S.coelcolorからのチロシンリン酸化タンパク質の抽出・分離は、抗ホスホチロシン抗体を用いた免疫沈降および二次元ゲル電気泳動(2D-PAGE)により行った。その結果、十数個のチロシンリン酸化タンパク質のスポットを2D-PAGEゲル上で見出すことができた。それらスポットについて、ゲル内トリプシン消化、それに続いてMS/MS解析を行うことにより、2つの機能未知タンパク質を同定することに成功した(SCO2364およびSCO5717)。SCO2364タンパク質は、そのC末端に4つの繰り返されたYGYPQモチーフを有しており、また、ストレスタンパク質に認められるTerDドメインを保有していることから、何らかのストレス応答タンパク質であると考えられた。一方、SCO5717タンパク質は、そのC末端にチロシンに富んだ配列を有しており、また、ATP結合モチーフであるWalkerモチーフを保有していることから、キナーゼであると推測された。これらタンパク質の機能を明らかにするため、それらタンパク質をコードする遺伝子を放線菌S.lividans 66およびS.coelicolorに導入した。その結果、SCO5717を導入した放線菌では、増殖の遅延および色素性抗生物質の生産抑制が認められた。この結果から、SCO5717はS.coelicolorにおいて、形態分化および抗生物質生産の制御に関与していることが示唆された。今後、さらなる解析を行う予定である。
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