生体内機構の解明を指向した任意の糖鎖を有する糖タンパク質の効率的合成

• 研究課題/領域番号: 16790027
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 化学系薬学
• 研究機関: 帝京大学
• 研究代表者: 荒井 緑 帝京大学, 薬学部, 助手 (40373261)
• 研究期間 (年度): 2004 – 2005
• 研究課題ステータス: 完了 (2005年度)
• 配分額: 2,900千円 (直接経費: 2,900千円); 2005年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円); 2004年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
• キーワード: タンパク質の品質管理 / 高マンノース型糖鎖 / 糖タンパク質 / 阻害剤 / マイクロプレート / 蛍光 / ビタミンD / 核内受容体 / グリコシデーション

研究概要

複雑な糖鎖プローブ合成とその生理活性の評価
昨年度に引き続き、糖タンパク質の品質管理機構解明の糖鎖プローブ合成とその生理活性の評価研究を行った。分子シャペロン(カルレティキュリンとその可溶型カルネキシン)の認識高マンノース型天然12糖のうち、グルコシダーゼIIの認識部位である分岐マンノース部を有せず、変わりに分子シャペロン認識部位をひとつ多く有する9糖を分子シャペロン阻害剤としてデザインし、合成した。品質管理機構に重要な分子シャペロンであるカルレティキュリンを組み換えタンパク質として大腸菌から発現させ、合成した本阻害剤とシャペロンとの結合能をITCを用いて測定したところ、天然12糖の結合能の約半分であることがわかった。次に、分子シャペロンの活性の阻害作用を検討した。分子シャペロンはマレイン酸デヒドロゲナーゼ(MDH)の熱変性し、MDHが凝集するのを防ぐ。この作用は糖などの存在で弱くなる。そこで、今回合成した糖の作用を検討したところ、合成9糖は予測どうり、分子シャペロンの作用を阻害し、MDHの熱変性による凝集が見られた。また、今回の分子は大腸菌で発現させたグルコシダーゼIIを含む抽出画分とインキュベーションしても、グルコースは除去されないことを、TOF-MASにより明らかにした。この画分は、天然12糖においては、分岐マンノース部があるため12糖を認識し、グルコースが除去されることも対象実験として行った。

研究成果

• [雑誌論文] Novel 2-Alkyl-1α,25-dihydroxy-19-norvitamin D_3 : Efficient Synthesis with Julia Olefination, Evaluation of Biological Activity, and Development of New Analyzing System on Coactivator Recruitment (2006)
  • 著者名/発表者名: Arai, M.A., Kittaka, A.
  • 雑誌名: Anticancer Research (in press)
• [雑誌論文] Synthesis of 25-hydoxy-19-Norvitamin D_3 Analogs and their antiproliferative activities on prostate cells (2005)
  • 著者名/発表者名: Arai, M.A., Tsutsumi, R., Chen, T.C., Sakaki, T., Urushimo, N., Inouye, K., Kittaka, A.
  • 雑誌名: Heterocycles 66 ページ: 469-479
• [雑誌論文] Design and Synthesis of Oligosaccharides that Interfere Glycoprotein Quality Control System (2005)
  • 著者名/発表者名: Arai, M.A., Matsuo, I., Hagihara, S., Totani, K., Maruyama, J.-I., Kitamoto, K., Ito, Y.
  • 雑誌名: ChemBioChem 6 ページ: 2281-2289
• [雑誌論文] Design and Synthesis of 19-Norvitamin D_3 Analogs as Prostate Cancer Chemoprevention Agents : Less Calcemic and Prohormone Like Activity (2005)
  • 著者名/発表者名: Arai, M.A., Tsutsumi, R., Chen, T.C., Holick, M.F., Sakaki, T., Urushimo, N., Inouye, K., Kittaka, A.
  • 雑誌名: Anticancer Research 25 ページ: 2279-2279
• [雑誌論文] Design, Synthesis and Biological Activity of Less Calcemic, Prohormone- and Hormone-like 19-Norvitamin D_3 Analogs for Prostate Cancer Treatment (2005)
  • 著者名/発表者名: Kittaka, A., Arai, M.A., Tsutsumi, R., Sakaki, T., Urushino, N., Inouye, K., Ito, S., Takeyama, K., Kato, S., Holick, M.F., Chen, T.C.
  • 雑誌名: J.Bone and Mineral Research 20
• [雑誌論文] Relationship of Stereochemical and Skeletal Diversity to Cellular Measurement Space (2004)
  • 著者名/発表者名: Kim, Y.-K., Arai, M.A., Arai, T., Lamenzo, J.O., Dean III, E.F., Patterson, N., Clemons, P.A., Schreiber, S.L.
  • 雑誌名: J.Am.Chem.Soc. 126 ページ: 14740-14745
• [雑誌論文] Synthesis of Fluorine Substituted Oligosaccharide Analogues of Monoglucosylated Glycan Chain, a proposed Ligand of Lectin-chaperone Calreticulin and Calnexin (2004)
  • 著者名/発表者名: Ito, Y., Hagihara, S., Arai, M.A., Matuo, I., Takatani, M.
  • 雑誌名: Glycoconjugate J. 21 ページ: 257-266
• [雑誌論文] Synthesis of Glycoprotein Molecular Probes for the Analyses of Protein Quality Control System (2004)
  • 著者名/発表者名: Totani, K., Matuo, I., Takatani, M., Arai, M.A., Hagihara, S., Ito, Y.
  • 雑誌名: Glycoconjugate J. 21 ページ: 69-74
• [雑誌論文] Accelerated Glycosylation under Frozen Conditions (2004)
  • 著者名/発表者名: Takatani, M., Nakano, J., Arai, M.A., Ishiwata, A., Ohta, H., Ito, Y.
  • 雑誌名: Tetrahedron Lett. 45 ページ: 3929-3932
• [雑誌論文] Development of the First Spiro Bis(isoxazoline) Ligands (SPRIXs) and Their Applications to Catalytic Enantioselective Reactions (2004)
  • 著者名/発表者名: Arai, M.A., Shinohara, T., Arai, T., Sasai, H.
  • 雑誌名: 有機合成化学協会誌 62 ページ: 59-69
  • NAID: 10011952500
• [雑誌論文] Spiro Bis(isoxazole) as a New Chiral Ligand (2004)
  • 著者名/発表者名: Wakita, K., Arai, M.A., Kato, T., Shinohara, T., Sasai, H.
  • 雑誌名: Heterocycles 62 ページ: 831-838