| 研究概要 |
(1)白血病細胞由来HSPを用いた免疫療法における抗白血病細胞特異抗体検出の検討
Balb/cマウス白血病細胞株A20および同系マウス肝由来のHSP70を精製し、健常Balb/cマウスに(1)PBS (control),(2)肝由来HSP70 (control),(3)A20-HSP 40ugを各群5匹に免疫し3週後の血清を採取し、各群マウス血清を用い以下の実験を行った。
(1)-1 抗A20細胞抗体を検出するため、各群の血清を一次抗体とし、 A20に対してFITC標識抗マウスIgを二次抗体とするflowcytometerを用いて平均蛍光強度(MFI)を算出した。(3)群のA20のMFIは(1),(2)群に比較して高値を示した。(1)-2特異抗体検出を確実に行うため、A20由来のHSP70を抗原とし、(1)-(3)の各群血清を1次抗体としてELISAを施行し、(3)群ではA20由来HSP70を認識するIgG抗体価は、(1),(2)群に比較して有意に高値を示したが、ATP処理し抗原ペプチドを解離したA20-HSP70が抗原とした場合この効果は失われた。また、A20特異抗原のA20産生IgG(A201g)に対する血清中IgG値をELISAにより算出したところ、A201g反応性IgG値は(3)群で有意に高値を示したが、 A20 Ig idiotype peptide前処理をした血清ではその効果は消失した。以上より、A20-HSP70の免疫マウスの血清中には、HSP70に結合するA20細胞由来白血病特異ペプチドに対する特異的IgGの産生が考えられた。
(2)in vitroにおける腫瘍特異抗体を介した細胞傷害活性誘導(CTX)の検討
(2)-1 各群血清と、補体を添加しCDC(補依存性CTX)を検討し、(3)群血清では(1)、(2)群に比べ有意なCDC活性を認めた。また単核球を加え傷害活性(ADCC)の誘導を検討したが3群で差を認めなかった。(1),(2)よりA20由来のHSP70免疫マウスの抗白血病細胞免疫機序の一つとして、白血病細胞由来HSP70に結合する腫瘍抗原ペプチドに対する特異抗体の産生と、その抗体を介したCDCの関与が示唆された。
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