| 研究課題/領域番号 |
16790833
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| 研究種目 |
若手研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
脳神経外科学
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| 研究機関 | 東京女子医科大学 |
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研究代表者 |
藍原 康雄 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (50287372)
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| 研究期間 (年度) |
2004 – 2005
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| 研究課題ステータス |
完了 (2005年度)
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| 配分額 *注記 |
2,800千円 (直接経費: 2,800千円)
2005年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
2004年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
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| キーワード | くも膜下出血 / 脳血管攣縮 / Housekeeping Gene / 18S Ribosomal RNA / β-actin / glyceraldehyde-3-phosphate(GAPDH) / genomic DNA / House keeping gene / RP-RCR / Genomic DNA / degenerate primer |
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| 研究概要 |
[目的]今回は、攣縮脳血管において、3種類のHousekeeping Gene発現量の増減を検討した。
[方法]イヌ二回出血モデルを用い、摘出した脳底動脈サンプルからは、血管内皮を除去した。今回、Housekeeping Geneの中でも分子生物学的手法において多用されている18S Ribosomal RNA、β-actin、glyceraldehyde-3-phosphate(GAPDH)以上3遺伝子の発現量変動を定量的Real-time PCRを用いて検索した。同時に、サンプル血管切片内の平滑筋細胞数を実測すべくDAPI染色を施行。同時にMIB1、PCNA、などの免疫化学的手法により、攣縮脳血管における平滑筋細胞分裂の程度を検索した。
[結果]GAPDH(566%,p<0.01)、β-actin(441%,p<0.02)、18S Ribosomal RNA(320%,p<0.05)のいずれも全て発現量が増大していた。攣縮血管より抽出されたtotal mRNAは、genomic DNAとの相対的値において、157%(p<0.01)増量していた。攣縮血管における平滑筋細胞数においては、明らかな増加は認められなかった。攣縮血管中膜における、細胞分裂の程度においては、MIB1、PCNAのいずれの免疫染色方法においても、コントロール群と比較し有意な変化は認められなかった。
[結論]Housekeeping Geneは、くも膜下出血後の標的遺伝子の変化を相対的に求めるためのコントロール遺伝子としては問題を生じることが予想された。今後は、genomic DNA量にて補正したmRNAの絶対量をもとに解析を進めることがより正確な手法であると考えられた。
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