| 研究課題/領域番号 |
16F16712
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| 研究種目 |
特別研究員奨励費
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 外国 |
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| 研究分野 |
神経生理学・神経科学一般
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| 研究機関 | 国立研究開発法人理化学研究所 |
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研究代表者 |
宮脇 敦史 (2017-2018) 国立研究開発法人理化学研究所, 脳神経科学研究センター, チームリーダー (80251445)
林 康紀 (2016) 国立研究開発法人理化学研究所, 脳科学総合研究センター, チームリーダー (90466037)
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| 研究分担者 |
ROSENDALE MORGANE 国立研究開発法人理化学研究所, 脳神経科学研究センター, 外国人特別研究員
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| 研究期間 (年度) |
2016-07-27 – 2019-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2018年度)
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| 配分額 *注記 |
2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
2018年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
2017年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
2016年度: 600千円 (直接経費: 600千円)
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| キーワード | Fluorescent protein / FRET / LTP / N-WASP / Calcium signalling / Long term potentiation / Biosensors / Protein engineering |
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| 研究実績の概要 |
シナプスにおける伝達効率の長期的変化の1つの形態としてLTP (long term potentiation)がある。LTPによりシナプス伝達効率が上昇するに伴い、シナプスの体積が大きくなることが知られている。そのメカニズムとして細胞骨格（アクチン繊維）が再構成されることが報告されている。 LTPを誘導する刺激が入ると、(1) シナプス内のカルシウムイオン濃度の上昇、(2) CaMKII (calcium-calmodulin-dependent kinase type II)の活性化、(3) CaMKIIによるRho1タンパク質の活性化、(4) アクチン繊維ネットワークの再構成、が順次起こるとされている。しかしながら、この過程の時空間的動態は未解明である。本課題では、(3)から(4)を媒介するN-WASPの活性化に注目した。
まず、N-WASPの活性を可視化するためFRETプローブ（N-WASP intramolecular sensorsおよびN-WASP/Arp2-3 inter-molecular sensors）の開発に取り組んだ。多くのプローブの作製と培養細胞を用いたスクリーニングを繰り返し、N-WASP活性化刺激に対して高い応答を示すプーブを得ることに成功した。本プローブ群を用いたLTP誘導時のN-WASP活性化の可視化解析は、京都大学医学部（林康紀研究室）にて行った。脳スライスにプローブを導入し、LTPを誘導した際のN-WASP活性化の時空間パターンを蛍光寿命顕微鏡FLIMを用いて検討した。LTPのトリガーとなるカルシウムイオン濃度変化からN-WASP活性変化、アクチン繊維変化、スパインの形態変化を包括的に解析することに成功した。N-WASPセンサーの開発と改良により、in vivoにおける神経シグナル伝達の理解促進が期待される。
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| 現在までの達成度 (段落) |
平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
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