| 研究実績の概要 |
今までの研究により外来遺伝子による転写後遺伝子抑制(PTGS)は外来遺伝子から生成されたpoly(A)鎖のないRNAがPTGSの引金になる事が明かとなった. しかしながら, 植物には内在のpoly(A)鎖を持つRNAにもかかわらず, PTGSの標的になるRNAが存在する. このRNAは特殊なRISCによってターゲティングされることが知られている. その代表例であるTAS3 RNAはRISCの標的部位を二つ持っていて5’側標的部位はRISCと結合し, 3’側標的部位はRISCによって切断される. TAS3の二つの標的部位はTAS RNAから生成される二次的小分子RNA (phasiRNA) 生合成に重要であることが知られている. しかしながら, なぜRISCによるTAS3のターゲティングがphasiRNA生成に重要なのかについては未だにわかっていない. 上記の疑問を解決するために,私はphasiRNAの試験管内再現を試した. タバコ培養細胞抽出液にTAS3によるphasiRNA生成経路に必要である因子らを発現させてからTAS3 RNAを入れることでphasiRNAが生成が確認された. この結果により, 私はTAS3 RNAによるphasiRNA生合成に成功した. 次にRISCによる切断がPTGSの開始ステップである二本鎖RNA合成に影響を及ぼすのかを調てみた. その結果, RISCの標的部位どちらかに変異が入っている場合,合成された相補鎖RNAは検出されなかった. この結果から, RISCによる結合とRISCによる切断は二本鎖合成に必要であることが明らかとなった.
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