| 研究課題/領域番号 |
16J40244
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| 研究種目 |
特別研究員奨励費
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 国内 |
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| 研究分野 |
人類遺伝学
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| 研究機関 | 名古屋大学 |
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研究代表者 |
松尾(楠本) 理加 名古屋大学, 環境医学研究所, 特別研究員(RPD)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-22 – 2020-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2019年度)
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| 配分額 *注記 |
3,250千円 (直接経費: 2,500千円、間接経費: 750千円)
2018年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2017年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2016年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
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| キーワード | Rad18 / Polη / DNA損傷トレランス / DNAポリメラーゼ / DNAポリメラーゼ・イータ / RAD18 / UV |
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| 研究実績の概要 |
DNA polymerase η (Polη)は損傷を鋳型にDNA合成を行うことができる損傷乗り越え型のDNAポリメラーゼである。Rad18は複製因子PCNAをユビキチン(Ub)化し、Polηはこの活性を促進する。また、Rad18はPolηとの直接結合や、複製因子PCNAのUb化によりPolηを損傷部位へリクルートする。我々はPolηのN末端がRad18のC末端と結合することを見出している。組換えタンパク質を用いた免疫沈降法により、Rad18との結合はPolηのN末端の方が全長よりも６倍程度強いことがわかった。この結果はPolηのC末端はRad18との結合を制御することを示唆している。また、PolηとRad18の結合はDNAにより阻害されることがわかった。これはPolηにおけるRad1結合部位とDNA結合部位が重複しているからであった。この結果から、Rad18がPolηをDNA損傷部位へリクルートするとRad18はDNAから乖離し、さらなるPCNAのUb化が起こりにくくなると考えらえる。次に、Rad18との結合に重要なPolηのアミノ酸のうち、DNAポリメラーゼ活性には影響を与えないアミノ酸KおよびLについて細胞レベルでの解析を行った。Polη欠損細胞である色素性乾皮症V群患者由来細胞にPolηのN末端、KまたはLまたはKLをAに置換したPolηのN末端を恒常的に過剰発現するベクターを導入した。これらの細胞の紫外線感受性をカフェイン存在下（チェックポイント機構が不活性化している状況）で調べたところ、KやL変異細胞は、変異がない細胞よりUV感受性が少し亢進していた。KL変異細胞はKやL変異細胞よりさらにUV感受性が亢進していた。これらの結果は、PolηのKやLがRad18との結合に重要で、このアミノ酸を介した両者の結合が紫外線応答に重要であることを示唆している。
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| 現在までの達成度 (段落) |
令和元年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
令和元年度が最終年度であるため、記入しない。
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