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深部超解像観察に向けた多光子過程を制御した蛍光顕微鏡の開発

研究課題

研究課題/領域番号 16K04983
研究種目

基盤研究(C)

配分区分基金
応募区分一般
研究分野 光工学・光量子科学
研究機関東京理科大学

研究代表者

須田 亮  東京理科大学, 理工学部物理学科, 教授 (80250108)

研究期間 (年度) 2016-04-01 – 2019-03-31
研究課題ステータス 完了 (2018年度)
配分額 *注記
4,680千円 (直接経費: 3,600千円、間接経費: 1,080千円)
2018年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円)
2017年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円)
2016年度: 2,860千円 (直接経費: 2,200千円、間接経費: 660千円)
キーワード深部観察 / 多光子過程 / 蛍光顕微鏡 / 超解像イメージング / 応用光学・量子光工学 / 非線形光学 / バイオイメージング
研究成果の概要

生体組織深部で高い分解能の蛍光観察を実現するため、蛍光標識となる蛍光タンパク質を意図的に褪色させる二光子励起法を確立し、時空間集光法による広視野二光子観察と合わせて、超解像蛍光イメージング技術を開発することを目的とした。eGFPの光褪色速度を測定したところ、二光子励起では励起状態吸収(ESA)誘起光の有無による変化量が小さく、超解像観察に必要な程度まで光褪色を制御することは困難であった。この原因を明らかにするため全反射照明型顕微鏡を構築し1分子観察を行った結果、ESAに続く電荷移動が可逆的な光明滅を引き起こしていること、不可逆的な光褪色はそれに連動して生じる副次的な現象であることが示唆された。

研究成果の学術的意義や社会的意義

蛍光タンパク質の褪色現象はその原因が明らかでないなか、超解像観察などにおいて積極的に利用されている。本研究では、深部観察に有効な二光子蛍光観察において褪色を利用することを試みたが、超解像観察に必要な程度まで褪色を制御することは困難であった。励起状態吸収に続く電荷移動が可逆的な光明滅を引き起こしていること、不可逆的な光褪色はそれに連動して生じる副次的な現象であることが原因と考えられ、これは褪色現象のさらなる解明と応用の展開に繋がるものである。

報告書

(4件)
  • 2018 実績報告書   研究成果報告書 ( PDF )
  • 2017 実施状況報告書
  • 2016 実施状況報告書
  • 研究成果

    (25件)

すべて 2019 2018 2017 2016

すべて 学会発表 (24件) (うち国際学会 9件) 図書 (1件)

  • [学会発表] 適応制御による蛍光タンパク質の光褪色の抑制2019

    • 著者名/発表者名
      本田成、矢野全一郎、池谷有貴、須田亮
    • 学会等名
      レーザー学会学術講演会第39回年次大会
    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
  • [学会発表] 蛍光タンパク質の光褪色過程における暗状態ダイナミクス2018

    • 著者名/発表者名
      坂田のどか, 秋澤一史, 詫間恵, 神山直人, 須田亮
    • 学会等名
      イメージングフロンティアセンターシンポジウム2018
    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
  • [学会発表] マクロレンズを用いた時空間集光による広視野二光子蛍光イメージング2018

    • 著者名/発表者名
      高橋達也、甲斐田幸希、須田亮
    • 学会等名
      イメージングフロンティアセンターシンポジウム2018
    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
  • [学会発表] 適応制御による蛍光タンパク質の光褪色抑制2018

    • 著者名/発表者名
      本田成、矢野全一郎、池谷有貴、須田亮
    • 学会等名
      イメージングフロンティアセンターシンポジウム2018
    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
  • [学会発表] 位相制御パルスを用いた二光子励起による深部イメージング2018

    • 著者名/発表者名
      池谷有貴、安藤宏樹、須田亮
    • 学会等名
      イメージングフロンティアセンターシンポジウム2018
    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
  • [学会発表] 光パルスの時間・空間位相を操作した二光子蛍光イメージング2018

    • 著者名/発表者名
      須田亮
    • 学会等名
      イメージングフロンティアセンターシンポジウム2018
    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
  • [学会発表] 蛍光タンパク質の光褪色過程における暗状態ダイナミクス2018

    • 著者名/発表者名
      坂田のどか, 秋澤一史, 詫間 恵, 神山直人, 須田亮
    • 学会等名
      第79回応用物理学会秋季学術講演会
    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
  • [学会発表] 1分子蛍光顕微鏡による蛍光タンパク質の光褪色過程の観察と制御2018

    • 著者名/発表者名
      坂田のどか,詫間恵,堀内柊冴,須田亮
    • 学会等名
      レーザー学会学術講演会第38回年次大会
    • 関連する報告書
      2017 実施状況報告書
  • [学会発表] 反射型SLMを用いたフェムト秒レーザーの振幅・位相変調2018

    • 著者名/発表者名
      本田成,池谷有貴,下村俊太郎,前迫啓志,須田亮
    • 学会等名
      レーザー学会学術講演会第38回年次大会
    • 関連する報告書
      2017 実施状況報告書
  • [学会発表] Adaptive control for two-photon excited fluorescence and photobleaching with a two-dimensional SLM2017

    • 著者名/発表者名
      S. Honda, S. Maesako, N. Kamiyama, K. Toda, and A. Suda
    • 学会等名
      CLEO-Pacific Rim 2017
    • 発表場所
      Marina Bay Sands Expo and Convention Center, Singapore
    • 年月日
      2017-07-31
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] Analysis of triplet/dark state dynamics of fluorescent molecules in the photobleaching process2017

    • 著者名/発表者名
      N. Sakata, S. Maesako, N. Kamiyama, N. Iwata, K. Toda, and A. Suda
    • 学会等名
      CLEO-Pacific Rim 2017
    • 発表場所
      Marina Bay Sands Expo and Convention Center, Singapore
    • 年月日
      2017-07-31
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] 2次元SLMを用いた2光子励起蛍光および光褪色の適応制御2017

    • 著者名/発表者名
      本田成、前迫啓志、神山直人、戸田圭亮、須田亮
    • 学会等名
      第64回応用物理学会春季学術講演会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜(神奈川県横浜市)
    • 年月日
      2017-03-15
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] 蛍光分子の光褪色過程における三重項/暗状態の過渡応答解析2017

    • 著者名/発表者名
      坂田のどか、前迫啓志、神山直人、岩田興典、須田亮
    • 学会等名
      第64回応用物理学会春季学術講演会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜(神奈川県横浜市)
    • 年月日
      2017-03-15
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] Dynamics of Triplet/Dark States of Fluorescent Molecules in the Photobleaching Process2017

    • 著者名/発表者名
      N. Sakata, S. Maesako, N. Kamiyama, K. Iwata, K. Toda, and A. Suda
    • 学会等名
      ALPS 2017
    • 関連する報告書
      2017 実施状況報告書 2016 実施状況報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] Adaptive Control for Reducing Photobleaching in Two-photon Excited Fluorescence2017

    • 著者名/発表者名
      S. Honda, S. Maesako, N. Kamiyama, K. Toda, and A. Suda
    • 学会等名
      ALPS 2017
    • 関連する報告書
      2017 実施状況報告書 2016 実施状況報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] Analysis of triplet/dark state dynamics of fluorescent molecules in photobleaching process2017

    • 著者名/発表者名
      N. Sakata, S. Maesako and A. Suda
    • 学会等名
      ISIF 2017
    • 関連する報告書
      2017 実施状況報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] Adaptive control of two-photon excited fluorescence and photobleaching2017

    • 著者名/発表者名
      S. Honda, S. Maesako N. Kamiyama and A. Suda
    • 学会等名
      ISIF 2017
    • 関連する報告書
      2017 実施状況報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] Bespoke microscope using macrolens for wide-field nonlinear imaging2017

    • 著者名/発表者名
      R. Kumar and A. Suda
    • 学会等名
      ISIF 2017
    • 関連する報告書
      2017 実施状況報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] Photobleaching properties of fluorescent proteins2017

    • 著者名/発表者名
      A. Suda
    • 学会等名
      ISIF 2017
    • 関連する報告書
      2017 実施状況報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] Optimization of biosensor and condition for FRET time-lapse imaging under two-photon excitation systems2017

    • 著者名/発表者名
      K. Takeuchi, M. Sugizawa, K. Tanaka, A. Suda, and T. Nakamura
    • 学会等名
      ISIF 2017
    • 関連する報告書
      2017 実施状況報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] Analysis of triplet/dark state dynamics of fluorescent molecules in the photobleaching process2017

    • 著者名/発表者名
      N. Sakata, S. Maesako, N. Kamiyama, N. Iwata, K. Toda, and A. Suda
    • 学会等名
      CLEO-PR 2017
    • 関連する報告書
      2017 実施状況報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] Adaptive control for two-photon excited fluorescence and photobleaching with a two-dimensional SLM2017

    • 著者名/発表者名
      S. Honda, S. Maesako, N. Kamiyama, K. Toda, and A. Suda
    • 学会等名
      CLEO-PR 2017
    • 関連する報告書
      2017 実施状況報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] EGFPの光褪色過程における三重項/暗状態の過渡応答解析2016

    • 著者名/発表者名
      坂田のどか、前迫啓志、神山直人、岩田興典、須田亮
    • 学会等名
      第2回イメージングフロンティアセンターシンポジウム
    • 発表場所
      東京理科大学 野田キャンパス(千葉県野田市)
    • 年月日
      2016-12-10
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] 二次元空間変調器を用いた二光子励起蛍光及び光褪色の適応制御2016

    • 著者名/発表者名
      本田成、前迫啓志、神山直人、戸田圭亮、須田亮
    • 学会等名
      第2回イメージングフロンティアセンターシンポジウム
    • 発表場所
      東京理科大学 野田キャンパス(千葉県野田市)
    • 年月日
      2016-12-10
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [図書] 表面・界面技術ハンドブック(分担執筆:広帯域パルスを用いた2光子蛍光顕微鏡)2017

    • 著者名/発表者名
      磯部圭佑、須田亮、緑川克美
    • 総ページ数
      796
    • 出版者
      株式会社エヌ・ティー・エス
    • ISBN
      9784864690751
    • 関連する報告書
      2017 実施状況報告書

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公開日: 2016-04-21   更新日: 2020-03-30  

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