| 研究課題/領域番号 |
16K08642
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
人類遺伝学
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| 研究機関 | 埼玉医科大学 |
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研究代表者 |
三谷 幸之介 埼玉医科大学, 医学部, 教授 (10270901)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2018年度)
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| 配分額 *注記 |
4,680千円 (直接経費: 3,600千円、間接経費: 1,080千円)
2018年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
2017年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
2016年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
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| キーワード | 遺伝子治療 / ゲノム編集 / 免疫不全症 / ウイルスベクター / 疾患モデルマーモセット |
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| 研究成果の概要 |
疾患モデルマーモセットの原因遺伝子であるIL2RG遺伝子エクソン3のDNA変異部位の近辺を標的とするCRISPRタンパク質とガイドRNAを電気穿孔法で、ドナーDNAをAAVベクターとして導入することによって、ヒトCD34陽性造血幹前駆細胞において、38%という高効率で相同組換え修復を達成した。これらの細胞から作った造血コロニーでは約20%であった。マーモセット造血コロニーでは約10%であった。
修復用ドナーDNAのランダムな染色体部位への組込みを防ぐためのネガティブ選択法として、iCaspase9自殺遺伝子をコードする修復用ドナーAAVベクターを産生した。今後、条件の至適化が必要である。
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| 研究成果の学術的意義や社会的意義 |
疾患モデルマーモセットの原因遺伝子であるIL2RG遺伝子エクソン3のDNA変異部位の近辺を標的とする、効率の良いCRISPRと標的配列の同定と、AAVベクターのデザインに成功した。そして実際にin vitroで、ヒトとマーモセットでの造血幹前駆細胞での遺伝子修復に成功した。まだ治療レベルから低く数倍の効率の改善が望まれるが、一度達成されれば世界初の霊長類を用いたゲノム編集治療の治療効果ならびに安全性の解析を行うことが可能となる。
また、修復用ドナーDNAのランダムな染色体部位への組込みを防ぐためのネガティブ選択法も、方法論の確率まであと一歩の所に到達している。
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