アンチトロンビン・レジスタンスの新規変異探索とマウスモデルによる病態解析研究

• 研究課題/領域番号: 16K09825
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 血液内科学
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 小嶋 哲人 名古屋大学, 医学系研究科(保健), 教授 (40161913)
• 研究分担者: 高木 明 名古屋大学, 医学系研究科(保健), 准教授 (30135371) ; 松下 正 名古屋大学, 医学部附属病院, 教授 (30314008)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2019-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2018年度)
• 配分額: 4,810千円 (直接経費: 3,700千円、間接経費: 1,110千円); 2018年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円); 2017年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円); 2016年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
• キーワード: アンチトロンビン・レジスタンス（ATR） / プロトロンビン / 遺伝子異常 / ATR検出・臨床検査法 / 自動化機器 / ATR残存凝固活性 / Na+結合領域 / Arg593Leuノックインマウス / トロンビン / アンチトロンビン / ジーンタ一ゲティング / R593Lノックインマウス / アンチトロンビン・レシスタンス（ATR） / 人工授精 / 内科

研究成果の概要

新しい血栓性素因・アンチトロンビン・レシスタンス（ATR）を示すプロトロンビン異常症（R596L）を報告、さらにATR検出検査法を確立して異なる変異（R596Q）も同定した。またNa+結合領域アミノ酸での単一塩基置換変異体の凝固活性特性を調べた結果、K599RおよびE592Qでは既報変異と同等のATR残存凝固活性を示した。さらにR593L (ヒトR596Lに相当)ノックインマウスは正常出生してATRを示したものの、プロトロンビンの抗原量70％、凝固一段法活性35％と低値で、ATR残存凝固活性が低値で、ヒトR596L変異と異なりR593L変異ホモマウスでは血栓リスクの可能性は低いと思われた。

研究成果の学術的意義や社会的意義

静脈血栓塞栓症の遺伝子異常判明例の約2/3は原因特定に至っていない中、申請者らが世界で初めて報告した新たな血栓性素因概念 アンチトロンビン・レジスタンス（ATR）の遺伝子異常を検索・解析は、従来にない独創的な発想の研究である。
本研究は、これまで原因特定に至ってない症例でのATR血栓性素因の同定とその詳細な病態解析、遺伝子組換体による新たなATR遺伝子異常の同定解析、ATRマウスの血栓症発症病態解析を行うもので、加齢とともに増加する深部静脈血栓・肺塞栓症の新しい診断法や予防法、治療法の開発に極めて有用な情報を提供することが予想され、超高齢化社会を迎えつつある日本において大きな社会的意義をもつ。

研究成果

• [国際共同研究] University of Belgrade(Serbia)
• [国際共同研究] University of Belgrade(Serbia)
• [雑誌論文] Molecular basis of SERPINC1 mutations in Japanese patients with antithrombin deficiency. (2019)
  • 著者名/発表者名: Tamura S, Hashimoto E, Suzuki N, Kakihara M, Odaira K, Hattori Y, Tokoro M, Suzuki S, Takagi A, Katsumi A, Hayakawa F, Suzuki A, Okamoto S, Kanematsu T, Matsushita T, Kojima T
  • 雑誌名: Thrombosis Research 巻: -
  • 査読あり
• [雑誌論文] Apparent synonymous mutation F9 c.87A>G causes secretion failure by in-frame mutation with aberrant splicing. (2019)
  • 著者名/発表者名: Odaira K, Tamura S, Suzuki N, Kakihara M, Hattori Y, Tokoro M, Suzuki S, Takagi A, Katsumi A, Hayakawa F, Okamoto S, Suzuki A, Kanematsu T, Matsushita T, Kojima T
  • 雑誌名: Thrombosis Research 巻: -
  • 査読あり
• [雑誌論文] Familial pulmonary thromboembolism with a prothrombin mutation and antithrombin resistance. (2018)
  • 著者名/発表者名: 10)Yoshida R, Seki S, Hasegawa J, Koyama T, Yamazaki K, Takagi A, Kojima T, Yoshimura M
  • 雑誌名: J Cardiol Cases. 巻: in press 号: 6 ページ: 197-199
  • DOI: 10.1016/j.jccase.2018.02.001
  • 査読あり
• [雑誌論文] Vwf K1362A resulted in failure of protein synthesis in mice． (2018)
  • 著者名/発表者名: Sanda N, Suzuki N, Suzuki A, Kanematsu T, Kishimoto M, Hasuwa H, Takagi A, Kojima T, Matsushita T, Nakamura S
  • 雑誌名: Int J Hematol. 巻: in press 号: 4 ページ: 428-435
  • DOI: 10.1007/s12185-017-2394-y
  • NAID: 120006501193
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Optimisation of antithrombin resistance assay as a practical clinical laboratory test: Development of prothrombin activator using factors Xa/Va and automation of assay (2018)
  • 著者名/発表者名: Tamura S.、Suga Y.、Tanamura M.、Murata-Kawakami M.、Takagi Y.、Hottori Y.、Kakihara M.、Suzuki S.、Takagi A.、Kojima T.
  • 雑誌名: International Journal of Laboratory Hematology 巻: 40 号: 3 ページ: 312-319
  • DOI: 10.1111/ijlh.12786
  • 査読あり
• [雑誌論文] Combined deficiency of factors V and VIII by chance coinheritance of parahaemophilia and haemophilia A, but not by mutations of either LMAN1 or MCFD2, in a Japanese family. (2018)
  • 著者名/発表者名: Suzuki S, Nakamura Y, Suzuki N, Yamazaki T, Takagi Y, Tamura S, Takagi A, Kanematsu T, Matsushita T, Kojima T
  • 雑誌名: Haemophilia. 巻: 24 号: 1
  • DOI: 10.1111/hae.13360
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Diagnosis and treatment guidelines for aberrant portal hemodynamics: The Aberrant Portal Hemodynamics Study Group supported by the Ministry of Health, Labor and Welfare of Japan (2017)
  • 著者名/発表者名: Moriyasu F, Furuichi Y, Tanaka A, Takikawa H, Yoshida H, Sakaida I, Obara K, Hashizume M, Kage M, Ohfuji S, Kitano S, Kawasaki S, Kokubu S, Matsutani S, Eguchi S, Shiomi S, Kojima T, Maehara Y, Kuniyoshi Y.
  • 雑誌名: Hepatol Res. 巻: 47 号: 5 ページ: 373
  • DOI: 10.1111/hepr.12862
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Clinical and biochemical characterization of the prothrombin Belgrade mutation in a large Serbian pedigree: new insights into the antithrombin resistance mechanism. (2017)
  • 著者名/発表者名: Miljic P, Gvozdenov M, Takagi Y, Takagi A, Pruner I, Dragojevic M, Tomic B, Bodrozic J, Kojima T, Radojkovic D, Djordjevic V.
  • 雑誌名: J Thromb Haemost. 巻: 15 号: 4 ページ: 670-677
  • DOI: 10.1111/jth.13618
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] First case report of hemophilia B Leyden in Japan. (2017)
  • 著者名/発表者名: Yamashita A, Nagae C, Mori M, Ashikaga T, Kojima T, Taki M
  • 雑誌名: Int J Hematol. 巻: 106 号: 1 ページ: 135-137
  • DOI: 10.1007/s12185-017-2194-4
  • 査読あり
• [雑誌論文] In vitro exploration of latent prothrombin mutants conveying antithrombin resistance. (2017)
  • 著者名/発表者名: Tamura S, Murata-Kawakami M, Takagi Y, Suzuki S, Katsumi A, Takagi A, Kojima T.
  • 雑誌名: Thromb Res. 巻: 159 ページ: 33-38
  • DOI: 10.1016/j.thromres.2017.09.020
  • 査読あり
• [雑誌論文] Missense mutations in the gene encoding prothrombin corresponding to Arg596 cause antithrombin resistance and thrombomodulin resistance (2016)
  • 著者名/発表者名: Takagi Y, Murata M, Kozuka T, Nakata Y, Hasebe R, Tamura S, Takagi A, Matsushita T, Saito H, Kojima T.
  • 雑誌名: THROMBOSIS AND HAEMOSTASIS 巻: 116 号: 12 ページ: 1022-31
  • DOI: 10.1160/th16-03-0223
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Progestin isoforms provide different levels of protein S expression in HepG2 cells. (2016)
  • 著者名/発表者名: Kozuka, Toshihiro Tamura, Shogo Kawamura, Nami Nakata, Yukiko Hasebe, Ryo Makiyama, Ayumi Takagi, Yuki Murata, Moe Mizutani, Naoki Takagi, Akira Kojima, Tetsuhito
  • 雑誌名: Thrombosis research 巻: 145 ページ: 40-5
  • DOI: 10.1016/j.thromres.2016.07.007
  • NAID: 120005895232
  • 査読あり
• [雑誌論文] Distinct X chromosomal rearrangements in four haemophilia B patients with entire F9 deletion. (2016)
  • 著者名/発表者名: Nakamura Y, Ando Y, Takagi Y, Murata M, Kozuka T, Nakata Y, Hasebe R, Takagi A, Matsushita T, Shima M, Kojima T.
  • 雑誌名: Haemophilia. 巻: 22 号: 3 ページ: 433-439
  • DOI: 10.1111/hae.12849
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [学会発表] スプライシング異常を引き起こす血液凝固第IX遺伝子サイレント変異・血友病B分子病態 (2018)
  • 著者名/発表者名: 大平晃也,田村彰吾,坂根寛人,所真昼,垣原美紗樹,服部有那,橋本恵梨華,鈴木幸子,高木夕希,高木明,兼松毅,岸本麻由子,鈴木伸明,松下正,小嶋哲人
  • 学会等名: 第40回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] F8 Inv22を含む複雑な変異を同定した重症血友病A症例の遺伝学的変異アレル由来の検索 (2018)
  • 著者名/発表者名: 垣原美紗樹,田村彰吾,服部有那,高木夕希,鈴木幸子,橋本恵梨華,坂根寛人,大平晃也,所真昼,高木明,小川実加,兼松毅,鈴木伸明,松下正,小嶋哲人
  • 学会等名: 第40回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] 脳梗塞を発症したフィブリノケゲン異常症の分子病態機能解析 (2018)
  • 著者名/発表者名: 服部有那,垣原美紗樹,高木夕希,鈴木幸子,橋本恵梨華,坂根寛人,大平晃也,所真昼,田村彰吾,高木明,鈴木伸明,松下正,小嶋哲人
  • 学会等名: 第40回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] 血液凝固第V因子欠乏症を合併する血友病 A 症例:第2報・凝血学的評価 (2018)
  • 著者名/発表者名: 鈴木幸子,高木夕希,坂根寛人,橋本恵梨華,垣原美紗樹,服部有那,大平晃也,所真昼,田村彰吾,高木明,鈴木敦夫,鈴木伸明,松下正,山崎鶴夫,小嶋哲人
  • 学会等名: 第40回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] Antithrombin resistance: a unique inherited thrombophilia (2018)
  • 著者名/発表者名: Tetsuhito Kojima
  • 学会等名: The 10th Congress of the Asian-Pacific Society on Thrombosis and Hemostasis
  • 国際学会 / 招待講演
• [学会発表] Functional analysis of a variant fibrinogen from dysfibrinogenemia patient with cerebral (2018)
  • 著者名/発表者名: Yuna Hattori, Takagi Yuki, Misaki Kakihara, Sachiko Suzuki, Koya Odaira, Mahiru Tokoro, Shogo Tamura, Tsuyoshi Kanemetsu, Nobuaki Suzuki, Tadashi Matsushita, Tetsuhito Kojima
  • 学会等名: The 10th Congress of the Asian-Pacific Society on Thrombosis and Hemostasis
  • 国際学会
• [学会発表] Haploid origin of unusual Inv22 X-chromosome carrying wild-type telomere region in severe hemophilia A patients (2018)
  • 著者名/発表者名: Misaki Kakihara, Shogo Tamura, Yuna Hattori, Sachiko Suzuki, Koya Odaira, Mahiru Tokoro, Takeshi Kanematsu, Nobuaki Suzuki, Tadashi Matsushita, Tetsuhito Kojima
  • 学会等名: The 10th Congress of the Asian-Pacific Society on Thrombosis and Hemostasis
  • 国際学会
• [学会発表] 特発生血栓 : アンチトロンビン抵抗性の診断－凝検査法を中心に－ (2018)
  • 著者名/発表者名: 高木明,田村彰吾,小嶋哲人
  • 学会等名: 第19回日本検査血液学会学術集会
  • 招待講演
• [学会発表] 血漿検体測定を目指したアンチトロンビン抵抗性凝固第X因子検出法の構築 (2018)
  • 著者名/発表者名: 田村彰吾,高木明,藤岡亮也,服部有那,垣原美紗樹,高木夕希,鈴木幸子,高木夕希,小嶋哲人
  • 学会等名: 第19回日本検査血液学会学術集会
• [学会発表] Peri-arteriolar megakaryopoieticmicroenviroment via reciprocal CLEC-2/PDPN axis mouse bone marrow (2018)
  • 著者名/発表者名: Shogo Tamura, Katsue Suzuki-Inoue, Yukio Ozaki, Tetsuhito Kojima
  • 学会等名: 第80回日本血液学会学術集会
  • 招待講演
• [学会発表] Molecular genetic analysis of dysfibrinogenemia including novel mutations with thrombosis (2018)
  • 著者名/発表者名: Yuna Hattori, Shogo Tamura, Misaki Kakihara, Sachiko Suzuki, Koya Odaira, Mahiru Tokoro, Humihiko Hayakawa, Tsuyoshi Kanemetsu, Nobuaki Suzuki, Tadashi Matsushita, Tetsuhito Kojima
  • 学会等名: 第80回日本血液学会学術集会
• [学会発表] 新しい遺伝性血栓性素因：アンチトロンビン・レジスタンス (2017)
  • 著者名/発表者名: 小嶋哲人
  • 学会等名: 第59回日本小児血液・がん学会学術集会
  • 招待講演
• [学会発表] Assessment of F9 mutation associated with inhibitor development in Japanese hemophilia B patients (2017)
  • 著者名/発表者名: Hiroto Sakane, Shogo Tamura, Erika Hashimoto, Akiya Fujioka, Ayumi Makiyama, Nami Kawamura, Sachiko Suzuki, Yuki Takagi, Tsuyoshi Kanematsu, Mayuko Kishimoto, Mika Ogawa, Nobuaki Suzuki, Tadashi Matsushita, Hiroshi Yada, Midori Shima, Tetsuhito Kojima
  • 学会等名: XXVI Congress of International Society on Thrombosis and Haemostasis
  • 国際学会
• [学会発表] Thrombin generation assay CANNOT identify antithrombin resistance during anticoagulant therapy (2017)
  • 著者名/発表者名: Yuki Takagi, Sachiko Suzuki, Nami Kawamura, Ayumi Makiyama, Hiroto Sakane, Erika Hashimoto, Akiya Fujioka, Shogo Tamura, Akira Takagi, Valentina Djordjevic, Tetsuhito Kojima
  • 学会等名: XXVI Congress of International Society on Thrombosis and Haemostasis
  • 国際学会
• [学会発表] Compound heterozygosity for mutations in ITGA2B including a novel p.Cys198Ser in Glanzmann Thrombasthenia (2017)
  • 著者名/発表者名: Erika Hashimoto, Shinji Kunishima, Yuki Takagi, Sachiko Suzuki, Ayumi Makiyama, Hiroto Sakane, Akiya Fujioka, Takahiro Uehara, Shogo Tamura, Akira Takagi, Tetsuhito kojima
  • 学会等名: XXVI Congress of International Society on Thrombosis and Haemostasis
  • 国際学会
• [学会発表] Unusual Genomic Rearrangement combined with Inv22 and wild-type X-chromosome in severe hemophilia A patients (2017)
  • 著者名/発表者名: Shogo Tamura, Misaki Kakihara, Yuna Hattori, Erika Hashimoto, Hiroto Sakane, Yuki Takagi, Mika Ogawa, Takeshi Kanematsu, Nobuaki Suzuki, Akira Takagi, Tadashi Matsushita, Tetsuhito kojima
  • 学会等名: XXVI Congress of International Society on Thrombosis and Haemostasis
  • 国際学会
• [学会発表] A NOVEL LARGE DELETION FOUND IN A JAPANESE FAMILY WITH ANTITHROMBIN DEFICIENCY (2016)
  • 著者名/発表者名: Erika HASHIMOTO, Yuki TAKAGI, Nami KAWAMURA, Ayumi MAKIYAMA, Hiroto SAKANE, Akiya FUJIOKA, Shogo TAMURA, Akira TAKAGI, Yoshifumi FUKUSHIMA, Makoto KANEKO, Tetsuhito KOJIMA
  • 学会等名: The 9th Congress of Asia Pacific Society of Thrombosis and Hemostasis (APSTH)
  • 発表場所: Taipei
  • 年月日: 2016-10-06
  • 国際学会
• [学会発表] Molecular basis of F8 gene abnormality in hemophilia A patients in Nagoya (2016)
  • 著者名/発表者名: Nami KAWAMURA, Ayumi MAKIYAMA, Yuki TAKAGI, Erika HASHIMOTO, Hiroto SAKANE, Akiya FUJIOKA, Shogo TAMURA, Akira TAKAGI, Nobuaki SUZUKI, Tadashi MATSUSHITA, Tetsuhito KOJIMA
  • 学会等名: The 9th Congress of Asia Pacific Society of Thrombosis and Hemostasis (APSTH)
  • 発表場所: Taipei
  • 年月日: 2016-10-06
  • 国際学会
• [学会発表] プロテインC欠乏症51家系のPROC遺伝子解析 (2016)
  • 著者名/発表者名: 槇山愛弓、高木夕希、河村奈美、橋本恵梨華、田村彰吾、高木明、岸本磨由子、鈴木伸明、松下正、小嶋哲人
  • 学会等名: 第17回日本検査血液検査血液学会学術集会
  • 発表場所: 博多
  • 年月日: 2016-08-06
• [学会発表] 低フィブリノゲン血症3症例の遺伝子解析 (2016)
  • 著者名/発表者名: 高木夕希、河村奈美、槇山愛弓、橋本恵梨華、安藤裕実、加藤衣央、田村彰吾、高木明、小嶋哲人
  • 学会等名: 第38回日本血栓止血学会学術集会
  • 発表場所: 奈良
  • 年月日: 2016-06-16
• [学会発表] Prothrombin missense mutations at 596Arg reduced the affinity of mutant thrombin to thrombomodulin controlled by Na+ concentration. (2016)
  • 著者名/発表者名: Yuki Takagi, Nami Kawamura, Ayumi Makiyama, Erika Hashimoto, Shogo Tamura, Akira Takagi, Tetsuhito Kojima
  • 学会等名: XXIX International Symposium on Technical Innovations in Laboratory Hematology (ISLH)
  • 発表場所: Milano, Italy
  • 年月日: 2016-05-12
  • 国際学会
• [図書] 臨床に直結する血栓止血学 (2018)
  • 著者名/発表者名: 朝倉英策 編著
  • 総ページ数: 688
  • 出版者: 中外医学社
  • ISBN: 9784498125797
• [図書] 徹底ガイド DICのすべて 2019-20 (2018)
  • 著者名/発表者名: 丸藤 哲 特集編集
  • 総ページ数: 450
  • 出版者: 総合医学社
  • ISBN: 9784883785599
• [図書] 血液疾患 最新の治療 2017-2019 (2017)
  • 著者名/発表者名: 兼松毅、小嶋哲人
  • 総ページ数: 372
  • 出版者: 南江堂
• [図書] みんなに役立つ 血友病の基礎と臨床 改訂3版 (2016)
  • 著者名/発表者名: 田村彰吾、小嶋哲人
  • 総ページ数: 463
  • 出版者: 医歯ジャーナル社
• [備考] Japanese Thrombophilia mutation database
  • URL: http://square.umin.ac.jp/bloodlab/Hematol_%26_Gene_Res_Lab/Japanese_Thrombophilia_mutation_database_%28JTMD%29.html
• [備考] Hematology & Gene research Lab
  • URL: http://square.umin.ac.jp/bloodlab/Hematol_%26_Gene_Res_Lab/Welcome.html
• [備考] 名古屋大学大学院医学系研究科 医療技術学専攻 病態形跡学講座 分子病態解析学部門 血液・遺伝子研究室
  • URL: http://square.umin.ac.jp/bloodlab/Hematol_%26_Gene_Res_Lab/Welcome.html
• [備考] 名古屋大学大学院医学系研究科 医療技術学専攻 病態解析学講座 分子病態解析学部門 血液・遺伝子研究室
  • URL: http://square.umin.ac.jp/bloodlab/Hematol_%26_Gene_Res_Lab/Welcome.html