E型肝炎ウイルスのゲノムRNAの複製機構に関与する宿主因子の機能解析

• 研究課題/領域番号: 16K19144
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: ウイルス学
• 研究機関: 自治医科大学
• 研究代表者: 小林 富成 自治医科大学, 医学部, 助教 (00634164)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2018-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2017年度)
• 配分額: 3,770千円 (直接経費: 2,900千円、間接経費: 870千円); 2017年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円); 2016年度: 2,340千円 (直接経費: 1,800千円、間接経費: 540千円)
• キーワード: E型肝炎ウイルス / レプリコン / リバースジェネティクス法 / 細胞培養 / ウイルス複製 / PSAPモチーフ / HEV / RNA複製 / PSAP / リアルタイムRT-PCR法

研究成果の概要

細胞内におけるHEVゲノムRNAの複製機構を明らかにするために、細胞内でゲノムRNAのみが複製するHEVレプリコンを構築した。試験管内で合成したレプリコンRNAを細胞に導入すると、細胞内でレプリコンRNAの複製と、複製産物であるsubgenomic RNAから翻訳されるORF3蛋白質を確認することができた。この結果、レプリコンRNAを用いることで、ゲノムRNAの複製機構の解析が可能であることが示唆された。また、ラットHEVのORF3蛋白質はウイルス粒子の放出に必須のアミノ酸配列(PSAP)を欠いている。そこで、各種変異体を構築し、PxYP配列の2つのプロリンが重要であることを明らかにした。

研究成果

• [雑誌論文] An analysis of two open reading frames (ORF3 and ORF4) of rat hepatitis E virus genome using its infectious cDNA clones with mutations in ORF3 or ORF4 (2018)
  • 著者名/発表者名: Tanggis、Kobayashi Tominari、Takahashi Masaharu、Jirintai Suljid、Nishizawa Tsutomu、Nagashima Shigeo、Nishiyama Takashi、Kunita Satoshi、Hayama Emiko、Tanaka Takeshi、Mulyanto、Okamoto Hiroaki
  • 雑誌名: Virus Research 巻: 249 ページ: 16-30
  • DOI: 10.1016/j.virusres.2018.02.014
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Full-length genome of a novel genotype 3 hepatitis E virus strain obtained from domestic pigs in Japan (2017)
  • 著者名/発表者名: Primadharsini PP, Miyake M, Kunita S, Nishizawa T, Takahashi M, Nagashima S, Tanggis, Ohnishi H, Kobayashi T, Nishiyama T, Jirintai S, Okamoto H
  • 雑誌名: Virus Research 巻: 240 ページ: 147-153
  • DOI: 10.1016/j.virusres.2017.08.003
  • 査読あり
• [雑誌論文] Characterization of the Quasi-Enveloped Hepatitis E Virus Particles Released by the Cellular Exosomal Pathway (2017)
  • 著者名/発表者名: Nagashima Shigeo、Takahashi Masaharu、Kobayashi Tominari、Nishizawa Tsutomu、Nishiyama Takashi、Primadharsini Putu Prathiwi、Okamoto Hiroaki、Tanggis
  • 雑誌名: Journal of Virology 巻: 91 号: 22
  • DOI: 10.1128/jvi.00822-17
  • 査読あり
• [雑誌論文] Characterization and epitope mapping of monoclonal antibodies raised against rat hepatitis E virus capsid protein: An evaluation of their neutralizing activity in a cell culture system. (2016)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi T, Takahashi M, Tanggis, Mulyanto, Jirintai S, Nagashima S, Nishizawa T, Okamoto H.
  • 雑誌名: Journal of Virological Methods 巻: 233 ページ: 78-88
  • DOI: 10.1016/j.jviromet.2016.03.004
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Enhanced pregenomic RNA levels and lowered precore mRNA transcription efficiency in a genotype A hepatitis B virus genome with C1766T and T1768A mutations obtained from a fulminant hepatitis patient. (2016)
  • 著者名/発表者名: Nishizawa T, Hoshino T, Naganuma A, Kobayashi T, Nagashima S, Takahashi M, Takagi H, Okamoto H
  • 雑誌名: Journal of General Virology 巻: 97 号: 10 ページ: 2643-2656
  • DOI: 10.1099/jgv.0.000566
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Analysis of adaptive mutations selected during the consecutive passages of hepatitis E virus produced from an infectious cDNA clone. (2016)
  • 著者名/発表者名: Nagashima S, Kobayashi T, Tanaka T, Tanggis, Jirintai S, Takahashi M, Nishizawa T, Okamoto H.
  • 雑誌名: Virus Research 巻: 223 ページ: 170-180
  • DOI: 10.1016/j.virusres.2016.07.011
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Production of monoclonal antibodies against the ORF3 protein of rat hepatitis E virus (HEV) and demonstration of the incorporation of the ORF3 protein into enveloped rat HEV particles. (2016)
  • 著者名/発表者名: Takahashi M, Kobayashi T, Tanggis, Jirintai S, Mulyanto, Nagashima S, Nishizawa T, Kunita S, Okamoto H
  • 雑誌名: Archives of Virology 巻: 161 号: 12 ページ: 3391-3404
  • DOI: 10.1007/s00705-016-3047-9
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [学会発表] 感染培養系を用いたE型肝炎治療薬の検討 (2017)
  • 著者名/発表者名: 小林 富成、西山 尚志、長嶋 茂雄、西澤 勉、高橋 雅春、唐 吉思、Putu Prathiwi Primadharsini、岡本 宏明
  • 学会等名: 第65回 日本ウイルス学会学術集会
• [学会発表] Development of a plasmid-based reverse genetics system for hepatitis E virus (2016)
  • 著者名/発表者名: 小林 富成、長嶋 茂雄、西澤 勉、唐 吉思、高橋 雅春、岡本 宏明
  • 学会等名: 第64回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 北海道 札幌市 札幌コンベンションセンター
  • 年月日: 2016-11-23