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菌体内脂肪酸アルデヒド定量法を用いたアルカン生産に特化した大腸菌の創製

研究課題

研究課題/領域番号 16K20986
研究種目

若手研究(B)

配分区分基金
研究分野 応用生物化学
ケミカルバイオロジー
研究機関東京大学

研究代表者

林 勇樹  東京大学, 大学院総合文化研究科, 助教 (90444059)

研究期間 (年度) 2016-04-01 – 2018-03-31
研究課題ステータス 完了 (2017年度)
配分額 *注記
4,030千円 (直接経費: 3,100千円、間接経費: 930千円)
2017年度: 650千円 (直接経費: 500千円、間接経費: 150千円)
2016年度: 3,380千円 (直接経費: 2,600千円、間接経費: 780千円)
キーワードタンパク質 / 進化分子工学 / バイオエネルギー / アルカン合成酵素 / アルカン合成関連酵素 / ハイスループットスクリーニング / アルカン生合成 / 遺伝子破壊株ライブラリ / アシルACP還元酵素 / アルデヒド脱ホルミル化酵素 / アシルACP / バクテリアルシフェラーゼ / 脂肪酸アルデヒド
研究成果の概要

大腸菌によるアルカン生産を実用化するには、高活性アルカン合成酵素群(AARとAD)の探索、基質供給を増強した代謝系、競合する遺伝子群の破壊が必要である。そこで、様々なラン藻由来のAARとADの活性比較を行い、最も高い活性を示すAARとADを同定した。また、菌体内アルデヒド生成量に応じて発光する大腸菌と化学発光撮影装置を用いて、1000種を超える変異体AARライブラリの細胞内アルカン生成量(AAR活性)をリアルタイムに評価できる系を構築に成功した。本手法により大腸菌ランダム遺伝子破壊株ライブラリから、AARの基質供給を増強し、アルカン生成と競合する遺伝子破壊株の高速スクリーニングが可能となった。

報告書

(3件)
  • 2017 実績報告書   研究成果報告書 ( PDF )
  • 2016 実施状況報告書
  • 研究成果

    (57件)

すべて 2018 2017 2016

すべて 雑誌論文 (2件) (うち査読あり 1件、 オープンアクセス 1件) 学会発表 (55件) (うち国際学会 2件、 招待講演 4件)

  • [雑誌論文] ラン藻由来アルカン合成関連酵素の高活性化と軽油生産性の向上2017

    • 著者名/発表者名
      新井宗仁、林勇樹、工藤恒
    • 雑誌名

      月刊 ファインケミカル

      巻: 46 ページ: 19-25

    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [雑誌論文] Comparison of aldehyde-producing activities of cyanobacterial acyl-(acyl carrier protein) reductases2016

    • 著者名/発表者名
      Hisashi Kudo, Ryota Nawa, Yuuki Hayashi, & Munehito Arai
    • 雑誌名

      Biotechnology for Biofuels

      巻: 9 号: 1 ページ: 234-234

    • DOI

      10.1186/s13068-016-0644-5

    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [学会発表] ラン藻由来アシルACP還元酵素の変異解析による炭化水素合成量の向上2018

    • 著者名/発表者名
      工藤恒、林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      日本農芸化学会2018年度大会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] 進化分子工学によるフィチン酸加水分解酵素の低温活性向上2018

    • 著者名/発表者名
      和田愛未、林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      日本農芸化学会2018年度大会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] ラン藻由来アシルACP還元酵素の変異解析による炭化水素合成量の向上2018

    • 著者名/発表者名
      工藤恒、林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第7回日本生物物理学会関東支部会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] 天然変性タンパク質HIV-1 Tatの構造特性と分子認識2018

    • 著者名/発表者名
      椢原朋子、林勇樹、工藤恒、河合秀信、岡芳樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第7回日本生物物理学会関東支部会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] 細胞内GTP定量センサーの開発2018

    • 著者名/発表者名
      岡芳樹、竹内恒、林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第7回日本生物物理学会関東支部会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] 細胞内GTP定量センサーの開発2017

    • 著者名/発表者名
      岡芳樹、竹内恒、林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第4回KEK-筑波大連携セミナー「生命の機能とかたち」
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] 細胞内GTP定量センサーの開発2017

    • 著者名/発表者名
      岡芳樹、竹内恒、林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      2017年度生命科学系学会合同年次大会(ConBio2017)ワークショップ「 多角的解析からみえてくるGTPの新たな機能と人疾患への治療戦略」
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] 中性に近いpHで抗体を精製可能な新規アフィニティーカラムの開発2017

    • 著者名/発表者名
      岡芳樹、澤田泰平、渡辺尚大、工藤恒、和田愛未、河合秀信、張マリ、林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      2017年度生命科学系学会合同年次大会(ConBio2017)
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] Improving activity and solubility of cyanobacterial enzymes for hydrocarbon biosynthesis2017

    • 著者名/発表者名
      Hisashi Kudo, Yuuki Hayashi, Munehito Arai
    • 学会等名
      第55回日本生物物理学会年会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] Rational design of a novel affinity ligand for antibody purification by controlling the pH-sensitive antibody interaction2017

    • 著者名/発表者名
      Yoshiki Oka, Taihei Sawada, Takahiro Watanabe, Hisashi Kudo, Manami Wada, Hidenobu Kawai, Mari Chang, Yuuki Hayashi, Munehito Arai
    • 学会等名
      第55回日本生物物理学会年会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] ラン藻由来炭化水素合成関連酵素の機能に重要なアミノ酸部位の探索2017

    • 著者名/発表者名
      工藤恒、林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      藍藻の分子生物学2017
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] In vivo real-time measurement of fatty aldehyde and its application2017

    • 著者名/発表者名
      Yuuki Hayashi, Munehito Arai
    • 学会等名
      第55回日本生物物理学会年会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] Interaction between two enzymes essential for cyanobacterial alkane biosynthesis2017

    • 著者名/発表者名
      Mari Chang, Keigo Shimba, Hisashi Kudo, Hidenobu Kawai, Yoshiki Oka, Manami Wada, Yuuki Hayashi, Munehito Arai
    • 学会等名
      第55回日本生物物理学会年会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] Mutational analysis of amino acid residues important for the function of an enzyme for alkane biosynthesis2017

    • 著者名/発表者名
      Masashi Nomura, Hisashi Kudo, Yuuki Hayashi, Munehito Arai
    • 学会等名
      第55回日本生物物理学会年会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] Structural analysis of the gliding protein Gli349 from Mycoplasma mobile by domain fragmentation2017

    • 著者名/発表者名
      Yuuki Hayashi, Junichi Inatomi, Yoshihiro Nomura, Manami Wada, Hisashi Kudo, Hidenobu Kawai, Yoshiki Oka, Yoshito Kawakita, Masaru Yabe, Tasuku Hamaguchi, Aya Takamori, Makoto Miyata, & Munehito Arai
    • 学会等名
      International Symposium on "Harmonized supramolecular motility machinery and its diversity
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] 細胞内酵素活性の可視化によるアシルACP還元酵素の進化分子工学2017

    • 著者名/発表者名
      林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第69回日本生物工学会大会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] c-Myb-KIX 間相互作用を阻害するペプチドの合理的設計2017

    • 著者名/発表者名
      季高駿士、岡芳樹 、林勇樹 、新井宗仁
    • 学会等名
      第17回日本蛋白質科学会年会ワークショップ「タンパク質科学における理論と実験の協奏」
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] 天然変性タンパク質c-Jun と転写コアクチベータCBP のKIX ドメインの相互作用2017

    • 著者名/発表者名
      吉崎慧、末松佑麿、季高駿士、椢原朋子、林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第17回日本蛋白質科学会年会ワークショップ「天然変性領域及びマルチサブユニット複合体の機能解析」
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] ラン藻由来アルカン合成関連酵素群の機能解析2017

    • 著者名/発表者名
      工藤恒、名和良太、林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第17回日本蛋白質科学会年会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] 天然変性タンパク質HIV-1 Tatの亜鉛とpHに依存した構造多様性2017

    • 著者名/発表者名
      椢原朋子、林勇樹、工藤恒、河合秀信、岡芳樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第17回日本蛋白質科学会年会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] 天然変性タンパク質c-Junと転写コアクチベータCBPのKIXドメインの相互作用2017

    • 著者名/発表者名
      吉崎慧、末松佑麿、季高駿士、椢原朋子、林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第17回日本蛋白質科学会年会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] 進化分子工学によるフィチン酸塩加水分解酵素の活性向上2017

    • 著者名/発表者名
      和田愛未、林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第17回日本蛋白質科学会年会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] 合理的設計による新規抗体精製用アフィニティーリガンドの開発2017

    • 著者名/発表者名
      岡芳樹、澤田泰平、渡辺尚大、工藤恒、和田愛未、河合秀信、張マリ、林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第17回日本蛋白質科学会年会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] ラン藻でのアルカン合成に必要な2つの酵素間の相互作用2017

    • 著者名/発表者名
      張マリ、榛葉啓悟、林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第17回日本蛋白質科学会年会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] c-Myb-KIX間相互作用を阻害するペプチドの合理的設計2017

    • 著者名/発表者名
      季高駿士、岡芳樹、林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第17回日本蛋白質科学会年会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] ラン藻由来アルカン合成関連酵素の機能解析2017

    • 著者名/発表者名
      工藤恒、名和良太、榛葉啓悟、林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第6回日本生物物理学会関東支部会
    • 発表場所
      早稲田大学先端生命医科学センター(東京都新宿区)
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] 進化分子工学によるフィチン酸塩加水分解酵素の活性向上2017

    • 著者名/発表者名
      和田愛未、林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第6回日本生物物理学会関東支部会
    • 発表場所
      早稲田大学先端生命医科学センター(東京都新宿区)
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] 合理的設計による抗体精製用アフィニティーリガンドFPAの改良2017

    • 著者名/発表者名
      岡芳樹、澤田泰平、渡辺尚大、工藤恒、和田愛未、河合秀信、張マリ、林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第6回日本生物物理学会関東支部会
    • 発表場所
      早稲田大学先端生命医科学センター(東京都新宿区)
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] Improving activity of a phytate-hydrolyzing enzyme by directed evolution2016

    • 著者名/発表者名
      Manami Wada, Yuuki Hayashi, Munehito Arai
    • 学会等名
      第54回日本生物物理学会年会
    • 発表場所
      つくば国際会議場(茨城県つくば市)
    • 年月日
      2016-11-25
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] Structural and functional analysis of a cyanobacterial enzyme for alkane biosynthesis2016

    • 著者名/発表者名
      Hisashi Kudo, Ryota Nawa, Yuuki Hayashi, Munehito Arai
    • 学会等名
      第54回日本生物物理学会年会
    • 発表場所
      つくば国際会議場(茨城県つくば市)
    • 年月日
      2016-11-25
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] Determination of domain boundaries and analysis of domain structures of the gliding protein Gli349 from Mycoplasma mobile2016

    • 著者名/発表者名
      Yuuki Hayashi, Yoshihiro Nomura, Manami Wada, Tasuku Hamaguchi, Aya Takamori, Masato Miyata, Munehito Arai
    • 学会等名
      第54回日本生物物理学会年会
    • 発表場所
      つくば国際会議場(茨城県つくば市)
    • 年月日
      2016-11-25
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] Alanine scanning mutagenesis reveals functional roles of conserved residues in an enzyme for alkane biosynthesis2016

    • 著者名/発表者名
      Masashi Nomura, Hisashi Kudo, Yuuki Hayashi, Munehito Arai
    • 学会等名
      第54回日本生物物理学会年会
    • 発表場所
      つくば国際会議場(茨城県つくば市)
    • 年月日
      2016-11-25
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] NMR analysis of structural fluctuation of a highly active mutant of Escherichia coli dihydrofolate reductase2016

    • 著者名/発表者名
      Takuro Nobe, Yuuki Hayashi, Munehito Arai
    • 学会等名
      第54回日本生物物理学会年会
    • 発表場所
      つくば国際会議場(茨城県つくば市)
    • 年月日
      2016-11-25
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] Rational design of a peptide inhibitor of the c-Myb-KIX interaction2016

    • 著者名/発表者名
      Shunji Suetaka, Yoshiki Oka, Yuuki Hayashi, Munehito Arai
    • 学会等名
      第54回日本生物物理学会年会
    • 発表場所
      つくば国際会議場(茨城県つくば市)
    • 年月日
      2016-11-25
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] Structural dynamics of a cyanobacterial alkane synthase studied by NMR and molecular dynamics simulations2016

    • 著者名/発表者名
      Yuma Suematsu, Yuji O. Kamatari, Yuuki Hayashi, Munehito Arai
    • 学会等名
      第54回日本生物物理学会年会
    • 発表場所
      つくば国際会議場(茨城県つくば市)
    • 年月日
      2016-11-25
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] Rational design of FPA, a ligand for antibody purification2016

    • 著者名/発表者名
      Yoshiki Oka, Taihei Sawada1, Takahiro Watanabe, Hisashi Kudo, Manami Wada, Hidenobu Kawai, Mari Chang, Yuuki Hayashi, Munehito Arai
    • 学会等名
      第54回日本生物物理学会年会
    • 発表場所
      つくば国際会議場(茨城県つくば市)
    • 年月日
      2016-11-25
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] Search for the binding sites between two enzymes essential for cyanobacterial alkane biosynthesis2016

    • 著者名/発表者名
      Mari Chang, Keigo Shinba, Yuuki Hayashi, Munehito Arai
    • 学会等名
      第54回日本生物物理学会年会
    • 発表場所
      つくば国際会議場(茨城県つくば市)
    • 年月日
      2016-11-25
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] Conformational diversity in the intrinsically disordered HIV-1 Tat protein induced by zinc and pH2016

    • 著者名/発表者名
      Tomoko Kunihara, Yuuki Hayashi, Hisashi Kudo, Hidenobu Kawai, Yoshiki Oka, Munehito Arai
    • 学会等名
      第54回日本生物物理学会年会
    • 発表場所
      つくば国際会議場(茨城県つくば市)
    • 年月日
      2016-11-25
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] Alanine scanning mutagenesis of a cyanobacterial alkane synthase2016

    • 著者名/発表者名
      Keigo Shimba, Fumitaka Yasugi, Yuuki Hayashi, Munehito Arai
    • 学会等名
      第54回日本生物物理学会年会
    • 発表場所
      つくば国際会議場(茨城県つくば市)
    • 年月日
      2016-11-25
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] Interaction of the intrinsically disordered c-Jun with the KIX domain of the transcriptional coactivator CBP2016

    • 著者名/発表者名
      Satoru Yoshizaki, Tomoko Kunihara, Yuuki Hayashi, and Munehito Arai
    • 学会等名
      第54回日本生物物理学会年会
    • 発表場所
      つくば国際会議場(茨城県つくば市)
    • 年月日
      2016-11-25
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] 脂肪酸アシルACP還元酵素のin vivo迅速活性評価法の開発2016

    • 著者名/発表者名
      林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第68回日本生物工学会年次大会
    • 発表場所
      富山国際会議場(富山県富山市)
    • 年月日
      2016-09-28
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] 合理的設計による抗体精製用リガンドFPAの開発2016

    • 著者名/発表者名
      岡芳樹、澤田泰平、渡辺尚大、林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第56回生物物理若手の会 夏の学校
    • 発表場所
      支笏湖ユースホステル(北海道千歳市)
    • 年月日
      2016-09-02
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] 石油をたくさん作る酵素の創製2016

    • 著者名/発表者名
      工藤恒、名和良太、林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第56回生物物理若手の会 夏の学校
    • 発表場所
      支笏湖ユースホステル(北海道千歳市)
    • 年月日
      2016-09-02
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] Structural analysis of the intrinsically disordered HIV-1 Tat protein2016

    • 著者名/発表者名
      Tomoko Kunihara, Yuuki Hayashi, Hisashi Kudo, Hidenobu Kawai, Yoshiki Oka, Munehito Arai
    • 学会等名
      27th International Conference on Magnetic Resonance in Biological Systems
    • 発表場所
      京都国際会館(京都府京都市)
    • 年月日
      2016-08-21
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] マイコプラズマ滑走タンパク質の構造ダイナミクス解析2016

    • 著者名/発表者名
      林勇樹
    • 学会等名
      新学術領域「運動超分子マシナリーが織りなす調和と多様性」第4回全体会議
    • 発表場所
      長崎大学(長崎県長崎市)
    • 年月日
      2016-06-08
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] Structural analysis of repeat domains in the Gli349 protein2016

    • 著者名/発表者名
      Yuuki Hayashi, Yoshihiro Nomura, Manami Wada, Munehito Arai
    • 学会等名
      新学術領域「運動超分子マシナリーが織りなす調和と多様性」第4回全体会議
    • 発表場所
      長崎大学(長崎県長崎市)
    • 年月日
      2016-06-08
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] マイコプラズマGli349タンパク質の立体構造解析2016

    • 著者名/発表者名
      和田愛未、野村芳弘、林勇樹、稲富純一、工藤恒、河合秀信、岡芳樹、宮田真人、新井宗仁
    • 学会等名
      第16回日本蛋白質科学会年会
    • 発表場所
      福岡国際会議場(福岡県福岡市)
    • 年月日
      2016-06-07
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] ラン藻でのアルカン合成に必要な2つの酵素間の結合部位の探索2016

    • 著者名/発表者名
      張マリ、榛葉啓悟、林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第16回日本蛋白質科学会年会
    • 発表場所
      福岡国際会議場(福岡県福岡市)
    • 年月日
      2016-06-07
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] 天然変性タンパク質HIV-1 Tatの立体構造解析2016

    • 著者名/発表者名
      椢原朋子、林勇樹、工藤恒、河合秀信、岡芳樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第16回日本蛋白質科学会年会
    • 発表場所
      福岡国際会議場(福岡県福岡市)
    • 年月日
      2016-06-07
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] アルカン合成酵素ADのNMRと分子動力学シミュレーションによるダイナミクス解析2016

    • 著者名/発表者名
      末松佑麿、鎌足雄司、林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第16回日本蛋白質科学会年会
    • 発表場所
      福岡国際会議場(福岡県福岡市)
    • 年月日
      2016-06-07
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] ラン藻由来アルカン合成関連酵素の構造機能解析2016

    • 著者名/発表者名
      工藤恒、名和良太、林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第16回日本蛋白質科学会年会
    • 発表場所
      福岡国際会議場(福岡県福岡市)
    • 年月日
      2016-06-07
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] ラン藻由来アルカン合成関連酵素を利用したバイオエネルギー生産2016

    • 著者名/発表者名
      工藤恒、名和良太、林勇樹、渡辺麻衣、池内昌彦、新井宗仁
    • 学会等名
      酵素工学研究会 第76回講演会
    • 発表場所
      東京大学(東京都文京区)
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] 合理的設計による抗体精製用リガンドFPAの開発2016

    • 著者名/発表者名
      岡芳樹、澤田泰平、渡辺尚大、林勇樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第16回日本蛋白質科学会年会
    • 発表場所
      福岡国際会議場(福岡県福岡市)
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] ラン藻由来アルカン合成関連酵素の構造機能解析とバイオエネルギー生産への応用2016

    • 著者名/発表者名
      工藤恒、名和良太、林勇樹、渡辺麻衣、池内昌彦、新井宗仁
    • 学会等名
      第16回 東京大学生命科学シンポジウム
    • 発表場所
      東京大学(東京都目黒区)
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書
  • [学会発表] 天然変性タンパク質HIV-1 Tatの立体構造解析2016

    • 著者名/発表者名
      椢原朋子、林勇樹、工藤恒、河合秀信、岡芳樹、新井宗仁
    • 学会等名
      第16回 東京大学生命科学シンポジウム
    • 発表場所
      東京大学(東京都目黒区)
    • 関連する報告書
      2016 実施状況報告書

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公開日: 2016-04-21   更新日: 2019-03-29  

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