| 研究課題/領域番号 |
17390106
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
人体病理学
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| 研究機関 | 藤田保健衛生大学 |
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研究代表者 |
堤 寛 藤田保健衛生大学, 医学部, 教授 (80138643)
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| 研究分担者 |
鴨志田 伸吾 藤田保健衛生大学, 医学部, 講師 (70351020)
下村 龍一 藤田保健衛生大学, 医学部, 助手 (20360232)
長坂 光夫 藤田保健衛生大学, 医学部, 講師 (70410701)
黒澤 良和 藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 教授 (10109259)
三浦 惠二 藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 助手 (20199946)
中野 浩 藤田保健衛生大学, 学長 (80097732)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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| 研究課題ステータス |
完了 (2006年度)
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| 配分額 *注記 |
10,900千円 (直接経費: 10,900千円)
2006年度: 4,500千円 (直接経費: 4,500千円)
2005年度: 6,400千円 (直接経費: 6,400千円)
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| キーワード | 炎症性腸疾患 / クローン病 / 潰瘍性大腸炎 / 抗体産生細胞 / 特異抗原 / モノクローナル抗体 / 病変特異的抗体 / 病変局所 / クラーナリティ / 抗体mRNA / 酵素抗原法 / クローナリティ |
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| 研究概要 |
本研究の目的は、炎症性腸疾患(クローン病・潰瘍性大腸炎)の病変局所で産生される抗体を解析して、疾患の解析・診断・治療に有用な抗体を見つけ出すことである。炎症性腸疾患の病変局所には多数の形質細胞が認められ、病変局所に浸潤することから、疾患に関連した抗体を産生しているものと思われる。そこで、病変部で特異的に産生される抗体mRNAをもとに抗体分子を調製して、対応抗原を解析するアプローチを計画した。
初年度は、炎症性腸疾患モデルマウスの病変大腸粘膜を対象に、抗体cDNAのクローナリティを解析した。その結果、炎症局所の抗体産生細胞には、クローナリティのあることが判明した。これは特異的な抗原刺激により、それに対応する抗体が、特異的に産生されている結果であると推測された。つまり、クローナリティを識別基準とした病変特異的な抗体のスクリーニング法の可能性が示された。
そこで2年目に、horseradish peroxidase (HRP)で免疫したラットの膝窩リンパ節の抗体cDNAを対象にクローナリティのある抗体cDNAを検索して、そのcDNAから調製したscFv型抗体が、抗原であるHRPに特異性を示すかを検討した。その結果、抗体H鎖、L鎖ともにクローナリティが認められた。しかし、クローナリティのある抗体cDNAからscFv型抗体を調製して、HRPに対するELISAを行った結果、これらのscFv型抗体はHRPに反応しなかった。さらに、リンパ節由来の抗体cDNAライブラリーから、抗HRP抗体をスクリーニングした結果、1種類の抗体が分離された。そのH鎖はクローナリティのあるクローンの1つと同じであったが、L鎖はクローナリティのないクローンと同じであった。これらのことから、病変局所でクローナリティを示す抗体cDNAは、必ずしも病変特異的な抗原に対する抗体をコードしているわけではないことが判明した。
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