C型肝炎ウイルスレプリコン系によるHCV増殖機構の解析とその制御

• 研究課題/領域番号: 17390216
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 消化器内科学
• 研究機関: 山梨大学
• 研究代表者: 榎本 信幸 山梨大学, 大学院・医学工学総合研究部, 教授 (20251530)
• 研究分担者: 前川 伸哉 山梨大学, 大学院・医学工学総合研究部, 講師 (70397298)
• 研究期間 (年度): 2005 – 2007
• 研究課題ステータス: 完了 (2007年度)
• 配分額: 17,200千円 (直接経費: 15,700千円、間接経費: 1,500千円); 2007年度: 6,500千円 (直接経費: 5,000千円、間接経費: 1,500千円); 2006年度: 5,000千円 (直接経費: 5,000千円); 2005年度: 5,700千円 (直接経費: 5,700千円)
• キーワード: HCV / レプリコン / NS5A / 脂質 / 自然免疫 / C型肝炎ウイルス / スフィンゴ脂質 / インターフェロン / GFP

研究概要

●NS5A-ISDR上流の過剰リン酸化部位のセリン残基について系統的なmutagenesis analysisを行い、レプリコン増殖成立にともない自然発生するこの部位のadaptive mutationの意義を検討した。その結果、HCVのインターフェロン効果に関連するNS5A-ISDRの変異がHCVレプリコンの増殖に大きな影響を与えることを明らかとした。
●HCV増殖細胞においてはRIG-I、MDA-5、およびIPS-1依存性のIRF-3活性化によるISRE活性の抑制が認められた。HCVの各非構造蛋白質を個別に発現させると、これらの抑制活性はNS3/4A蛋白の発現時に認められ、他の非構造蛋白発現では認められないことから、NS3/4Aが自然免疫抑制によるHCV持続感染増殖に関与していることが示唆された。
●高増殖株であるHCV-Nと低増殖株であるHC-J4を相互に組み換えるとNS3および3'UTRがHCV-N由来である場合にHC-J4の増殖力が増強することが明らかとなった。HCV-N由来のNS3はIRF-3活性化を強く増強するのに対して、HC-J4由来のNS3はIRF-3抑制活性が弱かった。さらにHC-J4由来のNS3を持つHCVであってもRIG-Iの欠失したHuh7.5細胞では増殖力が回復し自然免疫系とNS3との相互作用が示唆された。
●HCV増殖が脂質ラフト上で起こっていることから、脂質ラフトの構成成分であるスフィンゴ脂質合成阻害剤を加えたところHCV増殖抑制効果が認められた。この抑制効果は、SPTのknock downによっても認められる一方、スフィンゴ脂質合成の基質の添加で回復した。同様にコレステロールをbeta-cyclodextrinで吸着してもHCV増殖抑制効果が認められ、これらの脂質代謝標的としてHCV治療の可能性が示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] Development of plaque assays for hepatitis C virus-JFH1 strain and isolation of mutants with enhanced cytopathogenicity and replication capacity. (2008)
  • 著者名/発表者名: Sekine-Osajima Y, Sakamoto N, Mishima K, Nakagawa M, Itsui Y, Tasaka M, Nishimura-Sakurai Y, Chen CH, Kanai T, Tsuchiya K, Wakita T, Enomoto N, Watanabe M.
  • 雑誌名: Virology. 371 ページ: 71-85
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Targeting lipid metabolism in the treatment of hepatitis C virus infection. (2008)
  • 著者名/発表者名: Amemiya F, Maekawa S, Itakura Y, Kanayama A, Matsui A, Takano S, Yamaguchi T, Itakura J, Kitamura T, Inoue T, Sakamoto M, Yamauchi K, Okada S, Yamashita A, Sakamoto N, Itoh M, Enomoto N.
  • 雑誌名: J Infect Dis. 197 ページ: 361-370
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Targeting lipid metabolism in the treatment of hepatitis C virus infection (2008)
  • 著者名/発表者名: Amemiya, F., Maekawa, S., Itakura, Y., Kanayama, A., Matsui, A., Takano, S., Yamaguchi, T., Itakura, J., Kitamura, T., Inoue, T., Sakamoto, M., Yamauchi, K., Okada, S., Yamashita, A., Sakamoto, N., Itoh, M., Enomoto, N
  • 雑誌名: J Infect Dis 1 ; 197(3) ページ: 361-70
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Targeting lipid metabolism in the treatment of hepatitis C virus infection (2008)
  • 著者名/発表者名: Amemiya F, Maekawa S, Itakura Y, Kanayama A, Matsui A, Takano S, Yamaguchi T, Itakura J, Kitamura T, Inoue T, Sakamoto M, Yamauchi K, Okada S, Yamashita A, Sakamoto N, Itoh M, Enomoto N
  • 雑誌名: J Infect Dis. 197 ページ: 361-370
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of plaque assays for hepatitis C virus-JFH1 strain and isolation of mutants with enhanced cytopathogenicity and replication capacity (2008)
  • 著者名/発表者名: Sekine-Osajima Y, Sakamoto N, Mishima K, Nakagawa M, Itsui Y, Tasaka M, Nishimura-Sakurai Y, Chen CH, Kanai T, Tsuchiya K, Wakita T, Enomoto N, Watanabe M.
  • 雑誌名: Virology. 371 ページ: 71-85
  • 査読あり
• [雑誌論文] Hepatitis C virus non-structural proteins responsible for suppression of the RIG-I/Cardif-induced interferon response. (2007)
  • 著者名/発表者名: Tasaka M, Sakamoto N, Itakura Y, Nakagawa M, Itsui Y, Sekine-Osajima Y, Nishimura-Sakurai Y, Chen CH, Yoneyama M, Fujita T, Wakita T, Maekawa S, Enomoto N, Watanabe M.
  • 雑誌名: J Gen Virol. 88 ページ: 3323-3333
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Inhibition of hepatitis C virus infection and expression in vitro and invivo by recombinant adenovirus expressing short hairpin RNA. (2007)
  • 著者名/発表者名: Sakamoto N, Tanabe Y, Yokota T, Satoh K, Sekine-Osajima Y, Nakagawa M, Itsui Y, Tasaka M, Sakurai Y, Cheng-Hsin C, Yano M, Ohkoshi S, Aoyagi Y, Maekawa S, Enomoto N, Kohara M, Watanabe M.
  • 雑誌名: J Gastroenterol Hepatol. (Epub ahead of print)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of plaque assays for hepatitis C virus-JFH1 strain and isolation of mutants with enhanced cytopathogenicity and replication capacity (2007)
  • 著者名/発表者名: Sekine-Osajima, Y., Sakamoto, N., Mishima, K., Nakagawa, M., Itsui, Y., Tasaka, M.,Nishimura-Sakurai, Y., Chen CH, Kanai, T., Tsuchiya, K., Wakita, T., Enomoto, N., Watanabe, M
  • 雑誌名: Virology 5 ; 371(1)(Epub) ページ: 71-85
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Hepatitis C virus non-structural proteins responsible for suppression of the RIG-I/Cardif-induced interferon response (2007)
  • 著者名/発表者名: Tasaka, M., Sakamoto, N., Itakura, Y., Nakagawa, M., Itsui, Y., Sekine-Osajima, Y., Nishimura-Sakurai, Y., Chen CH, Yoneyama, M., Fujita, T., Wakita, T., Maekawa, S., Enomoto, N., Watanabe, M.
  • 雑誌名: J Gen Virol 88(Pt 12) ページ: 3323-33
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Inhibition of hepatitis C virus infection and expression in vitro and in vivo by recombinant adenovirus expressing short hairpin RNA (2007)
  • 著者名/発表者名: Sakamoto, N., Tanabe, Y., Yokota, T., Satoh, K., Sekine-Osajima, Y., Nakagawa, M., ItsuiY, Tasaka, M., Sakurai, Y., Cheng-Hsin, C., Yano, M., Ohkoshi, S., Aoyagi, Y., Maekawa, S., Enomoto, N., Kohara, M., Watanabe, M
  • 雑誌名: J Gastroenterol Hepatol 7
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Hepatitis C virus non-structural proteins responsible for suppression of the RIG-I/Cardif-induced interferon response (2007)
  • 著者名/発表者名: Tasaka M, Sakamoto N, Itakura Y, Nakagawa M, Itsui Y, Sekine-Osajima Y, Nishimura-Sakurai Y, Chen CH, Yoneyama M, Fujita T, Wakita T, Maekawa S, Enomoto N, Watanabe M
  • 雑誌名: J Gen Virol 88 ページ: 3323-3333
  • 査読あり
• [雑誌論文] Inhibition of hepatitis C virus infection and expression in vitro and in vivo byrecombinant adenovirus expressing short hairp RNA (2007)
  • 著者名/発表者名: Sakamoto N, Tanabe Y, Yokota T, Satoh K, Sekine-Osajima Y, Nakagawa M, Itsui Y, Tasaka M, Sakurai Y, Cheng-Hsin C, Yano M, Ohkoshi S, Aoyagi Y, Maekawa S, Enomoto N, Kohara M, Watanabe M
  • 雑誌名: J Gastroenterol Hepatol (Epub ahead Of print)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expressional screening of interferon-stimulated genes for antiviral activity against hepatitis C virus replication. (2006)
  • 著者名/発表者名: Itsui Y, Sakamoto N, Kurosaki M, Kanazawa N, Tanabe Y, Koyama T, Takeda Y, Nakagawa M, Kakinuma S, Sekine Y, Maekawa S, Enomoto N, Watanabe M.
  • 雑誌名: J Viral Hepat. 13 ページ: 690-700
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Site-specific mutation of the interferon sensitivity-determining region(ISDR)modulates hepatitis C virus replication. (2006)
  • 著者名/発表者名: Kohashi T, Maekawa S, Sakamoto N, Kurosaki M, Watanabe H, Tanabe Y, Chen CH, Kanazawa N, Nakagawa M, Kakinuma S, Yamashiro T, Itsui Y, Koyama T, Enomoto N, Watanabe M.
  • 雑誌名: J Viral Hepat. 13 ページ: 582-590
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Negative regulation of intracellular hepatitis C virus replication by interferon regulatory factor 3. (2006)
  • 著者名/発表者名: Yamashiro T, Sakamoto N, Kurosaki M, Kanazawa N, Tanabe Y, Nakagawa M, Chen CH, Itsui Y, Koyama T, Takeda Y, Maekawa S, Enomoto N, Sakugawa H, Watanabe M.
  • 雑誌名: J Gastroenterol. 41 ページ: 750-757
  • NAID: 10018255879
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Analysis of prognostic factors in therapeutic responses to interferon in patients with chronic hepatitis C. (2006)
  • 著者名/発表者名: Hosogaya S, Ozaki Y, Enomoto N, Akahane Y.
  • 雑誌名: Transl Res. 148 ページ: 79-86
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Viral load change and sequential evolution of entire hepatitis C virus genome in Irish recipients of single source-contaminated anti-Dimmunoglobulin*. (2006)
  • 著者名/発表者名: Itakura J, Nagayama K, Enomoto N, Hamano K, Sakamoto N, Fanning LJ, Kenny-Walsh E, Shanahan F, Watanabe M.
  • 雑誌名: J Viral Hepat. 12 ページ: 594-603
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expressional screening of interferon-stimulated genes for antiviral activity against hepatitis C virus replication (2006)
  • 著者名/発表者名: Itsui, Y., Sakamoto, N., Kurosaki, M., Kanazawa, N., Tanabe, Y., Koyama, T., Takeda, Y., Nakagawa, M., Kakinuma, S., Sekine, Y., Maekawa, S., Enomoto, N., Watanabe, M
  • 雑誌名: J Viral Hepat 13(10) ページ: 690-700
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Site-specific mutation of the interferon sensitivity-determining region (ISDR modulates hepatitis C virus replication (2006)
  • 著者名/発表者名: Kohashi, T., Maekawa, S., Sakamoto, N., Kurosaki, M., Watanabe, H., Tanabe, Y., Chen CH, Kanazawa, N., Nakagawa, M., Kakinuma, S., Yamashiro, T., Itsui, Y., Koyama, T., Enomoto, N., Watanabe, M
  • 雑誌名: J Viral Hepat 13(9) ページ: 582-90
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Negative regulation of intracellular hepatitis C virus replication by interferon regulatory factor 3 (2006)
  • 著者名/発表者名: Yamashiro, T., Sakamoto, N., KurOsaki, M., Kanazawa, N., Tanabe, Y., Nakagawa, M., Chen CH, Itsui, Y., Koyama, T., Takeda, Y., Maekawa, S., Enomoto, N., Sakugawa, H., Watanabe, M
  • 雑誌名: J Gastroenterol 41(8) ページ: 750-7
  • NAID: 10018255879
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Analysis of prognostic factors in therapeutic responses to interferon in patients with chronic hepatitis C (2006)
  • 著者名/発表者名: Hosogaya, S., Ozaki, Y., Enomoto, N., Akahane, Y
  • 雑誌名: Transl Res 148(2) ページ: 79-86
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Site-specific mutation of the interferon sensitivity-determining region (ISDR) modulates hepatitis C virus replication. (2006)
  • 著者名/発表者名: Kohashi T, Enomoto N, et al.
  • 雑誌名: J Viral Hepatitis 13 ページ: 582-90
• [雑誌論文] Negative regulation of intracellular hepatitis C virus replication by interferon regulatory factor-3. (2006)
  • 著者名/発表者名: Yamashiro T, Enomoto N, et al.
  • 雑誌名: J Gastroenterol 41 ページ: 750-7
  • NAID: 10018255879
• [雑誌論文] Expressional screening of interferon-stimulated genes for antiviral activity against hepatitis C virus replication. (2006)
  • 著者名/発表者名: Itsui Y, Enomoto N, et al.
  • 雑誌名: J Viral Hepatitis 13 ページ: 690-700
• [雑誌論文] Site-specific mutation of the interferon sensitivity-determining region(ISDR) modulates hepatitis C virus replication. (2006)
  • 著者名/発表者名: Kohashi T, Maekawa S, Sakamoto N, Watanabe H, Tanabe Y, Chen C-H, Nakagawa M, Kakinuma S, Enomoto N, Watanabe M.
  • 雑誌名: J Viral Hepatitis in press
• [雑誌論文] Expressional screening of interferon-stimulated genes for antiviral activity against hepatitis C virus replication. (2006)
  • 著者名/発表者名: Itsui Y, Sakamoto N, Kurosaki M, Kanazaw N, Tanabe Y, Koyama T, Takeda Y, Nakagawa M, Kakinuma S, Sekine Y, Maekawa S, Enomoto N, Watanabe M
  • 雑誌名: J Viral Hepatitis in press
• [雑誌論文] Consensus proposals for a unified system of nomenclature of hepatitis Cvirus genotypes. (2005)
  • 著者名/発表者名: Simmonds P, Bukh J, Combet C, Deleage G, Enomoto N, Feinstone S, Halfon P, Inchauspe G, Kuiken C, Maertens G, Mizokami M, Murphy DG, Okamoto H, Pawlotsky JM, Penin F, Sablon E, Shin-I T, Stuyver LJ, Thiel HJ, Viazov S, Weiner AJ, Widell A.
  • 雑誌名: Hepatology. 42 ページ: 962-973
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Mutagenic effects of ribavirin and response to interferon/ribavirin combination therapy in chronic hepatitis C. (2005)
  • 著者名/発表者名: Asahina Y, Izumi N, Enomoto N, Uchihara M, Kurosaki M, Onuki Y, Nishimura Y, Ueda K, Tsuchiya K, Nakanishi H, Kitamura T, Miyake S.
  • 雑誌名: J Hepatol. 43 ページ: 623-629
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Suppression of hepatitis C virus replication by cyclosporin a is mediated by blockade of cyclophilins. (2005)
  • 著者名/発表者名: Nakagawa M, Sakamoto N, Tanabe Y, Koyama T, Itsui Y, Takeda Y, Chen CH, Kakinuma S, Oooka S, Maekawa S, Enomoto N, Watanabe M.
  • 雑誌名: Gastroenterology. 129 ページ: 1031-1041
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Mutations in the NS5B region of the hepatitis C virus genome correlate with clinical outcomes of interferon-alpha plus ribavirin combination therapy. (2005)
  • 著者名/発表者名: Hamano K, Sakamoto N, Enomoto N, Izumi N, Asahina Y, Kurosaki M, Ueda E, Tanabe Y, Maekawa S, Itakura J, Watanabe H, Kakinuma S, Watanabe M.
  • 雑誌名: J Gastroenterol Hepatol. 20 ページ: 1401-1409
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Characteristic sequence changes of hepatitis C virus genotype 2b associated with sustained biochemical response to IFN therapy. (2005)
  • 著者名/発表者名: Tanabe Y, Nagayama K, Enomoto N, Izumi N, Tazawa J, Kurosaki M, Sakamoto N, Sato C, Watanabe M.
  • 雑誌名: J Viral Hepat. 12 ページ: 251-261
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Viral load change and sequential evolution of entire hepatitis C virus genoim in Irish recipients of single source-contaminated anti-D immunoglobulin* (2005)
  • 著者名/発表者名: Italtura, J., Nagayama, K., Enomoto, N., Hamano, K., Sakamoto, N., Fanning, LJ., Kenny-Walsh, E., Shanahan, F., Watanabe, M
  • 雑誌名: J Viral Hepat 12(6) ページ: 594-603
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Consensus proposals for a unified system of nomenclature of hepatitis C virus genotypes (2005)
  • 著者名/発表者名: Simmonds, P., Bukh, J., Combat, C., Deleage, G., Enomoto, N., Feinstone, S., Halfon, P., Inchauspe, G., Kuiken, C., Maertens, G., Mizokami, M., Murphy, DG., Okamoto, H., Pawlotsky, JM., Penin, F., Sablon, E., Shin-I,T., Stuyver, LJ., Thiel, HJ., Viazov, S., Weiner, AJ., Widen, A
  • 雑誌名: Hepatology 42(4) ページ: 962-73
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Mutagenic effects of ribavirin and response to interferon/ribavirin combination therapy in chronic hepatitis C (2005)
  • 著者名/発表者名: Asahina, Y., Izumi, N., Enomoto, N., Uchihara, M., Kurosaki, M., Onuki, Y., Nishimura, Y., Ueda, K., Tsuchiya, K., Nakanishi, H., Kitamura, T., Miyake, S
  • 雑誌名: J Hepatol 43(4) ページ: 623-9
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Suppression of hepatitis C virus replication by cyclosporin a is mediated by blockade of cyclophilins. (2005)
  • 著者名/発表者名: Nakagawa, M., Sakamoto, N., Tanabe, Y., Koyama, T., Itsui, Y., Takeda, Y., Chen, CH., Kakinuma, S., Oooka, S., Maekawa, S., Enomoto, N., Watanabe, M
  • 雑誌名: Gastroenterology 129(3) ページ: 1031-41
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Mutations in the NS5B region of the hepatitis C virus genome correlate with clinical outcomes of interferon-alpha plus ribavirin combination therapy (2005)
  • 著者名/発表者名: Hamano, K., Sakamoto, N., Enomoto, N., Izumi, N., Asahina, Y., Kurosaki, M., Ueda, E., Tanabe, Y., Maekawa, S., Itakura, J., Watanabe, H., Kakinuma, S., Watanabe, M
  • 雑誌名: J Gastroenterol Hepatol 20(9) ページ: 1401-9
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Characteristic sequence changes of hepatitis C virus genotype 2b associated with sustained biochemical response to IFN therapy (2005)
  • 著者名/発表者名: Tanabe, Y., Nagayama, K., Enomoto, N., Izumi, N., Tazawa, J., Kurosaki, M., Sakamoto, N., Sato, C., Watanabe, M
  • 雑誌名: J Viral Hepat 12(3) ページ: 251-61
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より