| 研究課題/領域番号 |
17390279
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
血液内科学
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
谷 憲三朗 九州大学, 生体防御医学研究所, 教授 (00183864)
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| 研究分担者 |
佐々木 えりか 実験動物中央研究所, 霊長類研究室, 研究員 (70390739)
末廣 陽子 九州大学, 病院・助手 (50380522)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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| 研究課題ステータス |
完了 (2006年度)
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| 配分額 *注記 |
15,400千円 (直接経費: 15,400千円)
2006年度: 5,900千円 (直接経費: 5,900千円)
2005年度: 9,500千円 (直接経費: 9,500千円)
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| キーワード | コモンマーモセット / ES細胞 / Tal1 / scl / glycophorin抗体 / ヒト胎児肝臓 / シュードタイプレンチウイルスベクター / cDNA発現ライブラリー / 白血病細胞株 / tall / SSEA4抗体 / tet-on / アデノウイルスベクター / 造血前駆細胞 / NOGマウス |
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| 研究概要 |
独自樹立コモンマーモセット(CM)胚性幹(ES)細胞から効率良い造血幹細胞ならびに血球分化系を確立することを最終目標に、in vitroにおいて効率良くCMES細胞を血球系細胞に分化することを明らかにしたtal1/scl遺伝子導入CMES細胞株を樹立し、先ずそのin vitroにおけるリンパ球ならびに巨核球系細胞への分化能を検討し、効率は低いものの、各特異的分化表面抗原を有する血球集団への分化を確認できた。一方、in vivo研究として同細胞を免疫不全(NOG)マウスに骨髄内投与を行いその経過を観察した。この結果NOGマウス肺内に腫瘍形成を認めたことより、血球分化を効率良く行うことが必要と考えられた。
そこでヒト胎児肝臓cDNA発現VSV-Gシュードタイプレンチウイルスベクターライブラリーを独自技術で作製した。本ライブラリーは独立クローン数として>8x10^7、平均cDNA長約2.1kbから構成され、一部をDNA配列解析した結果、その60%が多岐にわたるタンパク質の全長をコードしていることが判った。さらに本ライブラリーからウィルスを産生させ、293T細胞に感染させたところ、100%の細胞から遺伝子導入が確認できた。遺伝子導入されたcDNAの平均長は約1kbであり、Glycophorin A抗体を指標としたフローサイトメーター解析からは、導入されたライブラリー遺伝子がタンパク質レベルでも正しく発現していた。このライブラリーを用いてサイトカイン依存性白血病細胞株のサイトカイン非依存性ならびにtal1/scl遺伝子導入CMES細胞株の血球高分化能を指標にスクリーニングし、いくつかの白血病細胞株の自立増殖性もしくはCMES細胞の血球分化能に強く関連する可能性のある分子をクローン化した。ES細胞を効率良く分化する遺伝子の同定により、より安全で有効な細胞補充療法が可能になってくるものと期待される。
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