細胞培養上清のProteome解析による尿路性器癌腫瘍マーカーの同定

• 研究課題/領域番号: 17390439
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 泌尿器科学
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 中村 英二郎 京都大学, 医学研究科, 講師 (90293878)
• 研究分担者: 小川 修 京都大学, 医学研究科, 教授 (90260611) ; 賀本 敏行 京都大学, 医学研究科, 准教授 (00281098) ; 西山 博之 京都大学, 医学研究科, 講師 (20324642) ; 高橋 毅 京都大学, 医学研究科, 助手 (30362487)
• 研究期間 (年度): 2005 – 2007
• 研究課題ステータス: 完了 (2007年度)
• 配分額: 11,740千円 (直接経費: 11,200千円、間接経費: 540千円); 2007年度: 2,340千円 (直接経費: 1,800千円、間接経費: 540千円); 2006年度: 4,900千円 (直接経費: 4,900千円); 2005年度: 4,500千円 (直接経費: 4,500千円)
• キーワード: 尿路性器癌 / 腫瘍マーカー / ショットガンプロテオミクス / 細胞培養上清 / 泌尿生殖器癌 / 診断マーカー / プロテオミクス / Clusterin / 腎細胞癌 / EGLN3 / 副腎褐色細胞腫

研究概要

1.膀胱癌浸潤に関与する尿中マーカー候補蛋白質の同定
ショットガンプロテオミクスにより浸潤と関与する蛋白質としてケモカインの1種であるCXCL1を見出した。細胞株では発現量と浸潤能に正の相関が認められ、免疫組織染色において正常尿路上皮では認めず浸潤性膀胱癌で発現が亢進していた。CXCL1遺伝子導入により浸潤能が亢進し、CXCL1siRNAや中和抗体による機能抑制により浸潤能が抑制された。マイクロアレイで比較発現解析を行ったCXCL結果、MMP13の発現がCXCL1と相関しており、臨床検体においても同様の相関が示唆された。尿中CXCL1発現量をELISA法にて測定したところ、コントロール群に比して膀胱癌患者群で有意な発現レベルの亢進を認め、腫瘍間では浸潤癌で発現が亢進していた。CXCL1は膀胱癌浸潤に重要な役割をはたしており、新規尿中マーカーとしての有望性が示唆された。
2.腎細胞癌における培養細胞上清ならびに血清Proteome解析による腫瘍マーカーの探索
VHL(-/-)細胞株およびそのwild type VHL再導入細胞株の上清からの抽出蛋白を比較することで、pVHLにより制御される3種類の分泌蛋(IGFBP-3,PAエ-1,clusterin)を同定し、そのうち血清中のIGFBP-3はコントロール群に比べて腎細胞癌患者において有意な上昇を確認した。また、腫瘍マーカーの探索にむけて、血清を用いたショットガンプロテオーム解析を行い、担癌患者でのみ同定される蛋白質の中で癌組織でのmRNA発現が亢進している6種類の候補蛋白質を抽出した。2種の候補蛋白質についてはポリクローナル抗体を作製し、腎細胞癌細胞株並びに臨床検体においてWB・免疫組織染色を行ったところ、腎細胞癌において発現亢進が確認でき、現在、血清ELISAの実験系を樹立しRCCのバイオマーカーとしての有用性を検討中である。

研究成果

• [雑誌論文] Secreted CXCL1 is a potential Mediator and Marker of the Tumor Invasion of Bladder Cancer (2008)
  • 著者名/発表者名: Kawanishi H, Nishiyama H, Kamoto T, Nakamura E, Ogawa O.
  • 雑誌名: Clin Cancer Res 14 ページ: 2579-2587
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Secreted CXCL1 Is a Potential Mediator and Marker of the Tumor Invasion of Bladder Cancer (2008)
  • 著者名/発表者名: Kwanishi, H., Matsui, Y., Ito, M., Watanabe, J., Takahashi, T., Nishizawa, K., Nishiyama, H., Kamoto, T., Mikami, Y., Tanaka, Y., Jung, G., Akiyama, H., Nobumasa, H., Guilford, P., Reeve, A., Okuno, Y., Tsujimoto, G., Nakamura, E., Ogawa, O
  • 雑誌名: Clin Cancer Res 14 ページ: 2579-87
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Secreted CXCL1 is a potential Mediator and Marker of the Tumor Invasion of Bladder Cancer (2008)
  • 著者名/発表者名: Kawanishi H, Nishiyama H, Kamoto T, Nakamura E, Ogawa O.
  • 雑誌名: Clin Cancer Res (in press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] STAT3 polymorphism predicts interferon-alfa response in patients with metastatic renal cell carcinoma. (2007)
  • 著者名/発表者名: Ito N, Nakamura E, Ogawa O.
  • 雑誌名: J Clin Oncol 25 ページ: 2785-2791
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] STAT3 polymorphism predicts the interferon-response in patients with metastatic renal cell carcinoma (2007)
  • 著者名/発表者名: N., Ito, M., Eto, E., Nakamura, A., Takahashi, T., Tsukamoto, H., Toma, H., Nakazawa, Y., Hirao, H., Uemura, S., Kagawa, H., Kanayama, Y., Nose, N., Kinukawa, T., Nakamura, N., Jinnai, T., Seki, M., Takamatsu, Y., Masui, S., Naito, Osamu, Ogawa
  • 雑誌名: J Clin Onco 125 ページ: 2785-2791
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Clusterin is a secreted marker for a hypoxia-inducible factor-independent function of Von Hippel-Lindau tumor suppressor protein. (2006)
  • 著者名/発表者名: Nakamura E, Kamoto T, Ogawa O, Kaelin WG.
  • 雑誌名: Am J Pathol. 168 ページ: 574-584
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Kaelin. Clusterin is a secreted marker for a hypoxia-inducible factor-independent function of Von Hippel-Lindau tumor suppressor protein (2006)
  • 著者名/発表者名: Nakamura, P., Abeu-e-Lima, Y., Awakura, T., Inoue, T., Kamoto, O., Ogawa, H., Kotani, T., Manabe, G., Zhang, K., Kondo, V., Nose, WG
  • 雑誌名: Am J Pathol 168 ページ: 574-584
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Clusterin is a Secreted Marker for a HIF-independent Function of the VHL Tumor Suppressor Protein. (2006)
  • 著者名/発表者名: Nakamura E, Abreu-e-Lima P, Awakura Y, Inoue T, Kamoto T, Ogawa O, Kotani H, Manabe T, Zhang GJ, Kondo K, Nose V, Kaelin WG Jr.
  • 雑誌名: Am J Pathol 168(2): ページ: 574-584
• [雑誌論文] Neuronal Apoptosis linked to EglN3 Proly1 Hydroxylase and Familial Pheochromocytoma Genes : Developmental Culling and Cancer. (2006)
  • 著者名/発表者名: S Lee^*, E Nakamura^*, H Yang, W Wei, MS Linggi, MP.Sajan, RV Farese, Rs Freeman, BD Carter, WG Kaelin, S Schlisio
  • 雑誌名: Cancer Cell 8 ページ: 155-167
• [雑誌論文] Neuronal Apoptosis linked to EglN3 Prolyl Hydroxylase and Familial Pheochromocytoma Genes: Developmental Culling and Cancer. (2005)
  • 著者名/発表者名: Lee S, Nakamura E, Yang H, Wei W, Linggi MS, Sajan MP, Farese RV, Freeman RS, Carter BD, Kaelin WG, and Schlisio S.
  • 雑誌名: Cancer Cell 8 ページ: 155-167
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Neuronal Apoptosis linked to EgIN3 Prolyl Hydroxylase and Familial Pheochromocytoma Genes : Developmental Culling and Cancer. (Co-First Author) (2005)
  • 著者名/発表者名: S., Lee, E., Nakamura, H., Yang, W., Wei, MS., Linggi, MP., Sajan, RV., Farese, RS., Freeman, BD., Carter, WG., Kaelin, S., Schlisio
  • 雑誌名: Cancer Cells 8 ページ: 155-167
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Antiandrogen bicalutamide promotes tumor growth in a novel androgen dependent prostate cancer xenograft model derived from a bicalutamide treated patient. (2005)
  • 著者名/発表者名: T.Yoshida, H.Kinoshita, T.Segawa, E.Nakamura, T.Inoue, Y.Shimizu, T.Kamoto, O.Ogawa
  • 雑誌名: Cancer Res. 65(21) ページ: 9611-9616
• [雑誌論文] Multiple roles of Rbx1 in the VBC-Cul2 ubiquitin ligase complex. (2005)
  • 著者名/発表者名: Megumi Y, Miyauchi Y, Sakurai H, Nobeyama H, Lorick K, Nakamura E, Chiba T, Tanaka K, Weissman AM, Kirisako T, Ogawa O, Iwai K
  • 雑誌名: Genes Cells 10(7) ページ: 679-691
• [雑誌論文] Monthly paclitaxel and carboplatin with oral estramustine phosphate in patients with hormone refractory prostate cancer. (2005)
  • 著者名/発表者名: T Segawa, T Kamoto, E Nakamura, O Ogawa
  • 雑誌名: Int J Clin.Oncology 10: ページ: 333-337
• [雑誌論文] The expression of NOV and WT1 in renal cell carcinoma : a quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction analysis. (2005)
  • 著者名/発表者名: Niu Z, Ito M, Awakura Y, Takahashi T, Nakamura E, Ito N, Ogawa O.
  • 雑誌名: J Urol 174: ページ: 1460-1462
• [学会発表] Cell culture proteome identifies CXCL1 as a secreted marker and mediator for the tumor invasion of bladder cancer. (2007)
  • 著者名/発表者名: 川西 博晃、中村 英二郎、西山 博之、賀本 敏行、小川 修
  • 学会等名: 2007米国泌尿器科学会総会
  • 発表場所: アメリカ、アナハイム
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] Secreted CXCL1 is a Mediator and Marker of the Tumor Invasion of Bladder Cancer (2007)
  • 著者名/発表者名: Kwanishi, H., Nakamura, E., Nishiyama, H., Kamoto, T., Ogawa, O
  • 学会等名: 2007 annual congress meeting of AUA
  • 発表場所: Anahaim, USA
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [学会発表] Identification of serum biomarkers of renal cell carcinoma by proteomic analysis (2006)
  • 著者名/発表者名: Yamasaki, T., Nakamura, E., Kwanishi, H., Awakura, Y., Kamba, T., Ito, N., Kamoto, T., Ogawa, O
  • 学会等名: 65th annual meeting of Japanese Cancer Association
  • 発表場所: yokohama
  • 年月日: 2006-09-29
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より