| 研究課題/領域番号 |
17404021
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 海外学術 |
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| 研究分野 |
生物機能・バイオプロセス
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
栗原 達夫 京都大学, 化学研究所, 准教授 (70243087)
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| 研究分担者 |
江崎 信芳 京都大学, 化学研究所, 教授 (50135597)
三原 久明 京都大学, 化学研究所, 助教 (30324693)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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| 研究課題ステータス |
完了 (2006年度)
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| 配分額 *注記 |
12,900千円 (直接経費: 12,900千円)
2006年度: 6,200千円 (直接経費: 6,200千円)
2005年度: 6,700千円 (直接経費: 6,700千円)
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| キーワード | 低温菌 / 好冷菌 / 低温活性酵素 / 有用酵素 / 有用遺伝子 / 応用微生物 / 特殊環境 |
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| 研究概要 |
1.産業上有用な好冷性酵素などの生産に適したタンパク質生産システムの開発を目的として、宿主となる低温菌の探索を行った。シベリア永久凍土、アラスカ永久凍土、フィンランド北極圏土壌などから、4℃付近での生育が速く、タンパク質の分泌生産能に優れた低温菌を選抜した。
2.オーストリア国インスブルックの氷河地域を探索し、低温菌の分離源となる土壌を採取した。
3.寒冷地での廃液処理などに有用と期待される低温活性カタラーゼを南極海水由来のShewanella livingstonensis Ac10から精製し、諸性質を明らかにした。
4.フィンランド土壌由来Bacillus globisporus B9の培養上清に、著量のS-layer proteinホモログが蓄積することを見いだした。本タンパク質の分泌シグナル配列と遺伝子のプロモーター配列を用いることで、外来タンパク質を分泌高生産するシステムが構築できると考えられた。プロトプラスト法によって本菌を形質転換する方法を確立した。
5.シベリア永久凍土から分離したAcinetobacter sp. strain no.6を宿主とした異種タンパク質生産系を構築した。
6.アラスカ永久凍土からヘモリシン共制御タンパク質ホモログを分泌高生産するPseudomonas sp.Ak26を単離した。本タンパク質の分泌システムを利用して異種タンパク質高生産系を開発することを目的として研究を行った。広宿主域ベクターであるpJRD215を有したEscherichia coli S17-1株と接合させることにより、形質転換が可能であることを見いだした。さらに、本菌が高生産するOprD遺伝子のプロモーター及びSD配列をpJRD215に組み込むことにより、本菌で機能する高発現用ベクターを構築した。
7.南極海水から分離したShewanella livingstonensis Ac10の低温環境適応機構を解析するとともに、本菌を宿主とした外来タンパク質生産系を開発した。
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