| 研究課題/領域番号 |
17570007
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
遺伝・ゲノム動態
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| 研究機関 | 首都大学東京 |
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研究代表者 |
駒野 照弥 首都大学東京, 大学院理工学研究科, 客員教授 (00087131)
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| 研究分担者 |
古屋 伸久 首都大学東京, 大学院理工学研究科, 助手 (50244413)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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| 研究課題ステータス |
完了 (2006年度)
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| 配分額 *注記 |
3,400千円 (直接経費: 3,400千円)
2006年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
2005年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
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| キーワード | 遺伝学 / 細菌 / IncI1プラスミドR64 / 接合伝達 / シャフロン |
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| 研究概要 |
IncI1プラスミドR64の54kbの接合伝達領域は、49個の遺伝子を含む。そのうち24遺伝子が表面接合伝達に必須であり、液内接合伝達にはさらにIV型線毛をコードする12個のpil遺伝子が必要である。IV型線毛の先端に局在するPilVアドヘシンのC末部はシャフロンのDNA多重逆位により7種に変換する。
1.R64のプレピリンペプチダーゼをコードするPilU遺伝子の42株の突然変異株を分離し、PilUの構造と機能の関係を明らかにするとともに、PilUがアスパラギン酸ペプチダーゼであることを証明した。
2.接合伝達遺伝子群発現の正の調節遺伝子TraCが組換え酵素RciのC末部に作用することにより、シャフロン組換えの頻度を負に調節していることが示唆された。
3.シャフロンの組換え配列sfxは、他の組換え系と異なり非対称であることが明らかになっている。一方、シャフロンにより調節される7種PilVアドヘシンの発現は一定ではなく、平衡状態ではPilVA、PilVA'の発現が高い。それぞれ左右アーム配列の異なる2種のsfx配列を両端にもつミニシャフロンでは、Rciの存在下で平衡時に正逆いずれかにずれていることが示された。これはsfx配列の非対称性が、7種PilV発現量の相違の原因になっている可能性を示す。
4.R64の接合伝達はNikABタンパクによるoriTへの特異的ニックの導入で開始する。oriT結合タンパクNikAのNMR解析を行った結果、NikAのアミノ末端側51残基の領域が二量体を形成して、リボン-ヘリックス-ヘリックス(RHH)のDNA結合構造を形成していることが明らかとなった。SELEX法によりoriTコア配列中のACGGTA配列がNikA認識配列となることを推定した。
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