| 研究課題/領域番号 |
17590165
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
解剖学一般(含組織学・発生学)
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| 研究機関 | 宮崎大学 |
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研究代表者 |
吉永 一也 宮崎大学, 医学部, 助教授 (50136719)
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| 研究分担者 |
谷井 一郎 宮崎大学, 医学部, 助手 (40207171)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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| 研究課題ステータス |
完了 (2006年度)
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| 配分額 *注記 |
1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
2006年度: 600千円 (直接経費: 600千円)
2005年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
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| キーワード | 精子先体 / 卵子透明帯 / 精子・卵子相互作用 / 受精 / 体外受精 / モノクローナル抗体 / 免疫組織細胞化学 / 電子顕微鏡 / モクローナル抗体 / 精子先体マトリックス蛋白 |
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| 研究概要 |
1.先体分子の挙動解析:ハムスターの体外受精実験系に蛍光標識法や金コロイド免疫電顕法を応用して調べた結果、MC41は先体反応前の精子先体外膜直下の先体マトリックス皮質領域に限局して存在した。媒精5〜10分後の精子・卵子試料では、MC41が先体反応後のハイブリット小胞遺残体(先体マトリックスを主構成要素とする先体遺残体acrosomal ghost)と隣接した卵子透明帯表面、および両者の接触部に局在することを証明した。
2.先体分子の役割解析:MC41抗体存在下で体外受精実験を行った結果、媒精5〜10分後、透明帯に接着した精子数は対照群に比べ有意差を認めなかった。しかしその後、接着した精子にピペッティングによる物理的操作を加えると、透明帯に結合した精子数はMC41抗体存在下で激減、結合の維持が阻害された。以上の結果から、先体特異分子MC41は先体内部マトリックスに区画化されて存在し、先体反応後の遺残体を介して、精子・卵子透明帯結合の維持に深く関与していると考えられた。なお、MC41抗体を卵管内に微小注入して体内受精実験を試みた結果、顕著な受精阻害効果は認められなかった。
3.MC41抗原分子の同定:マウスおよびラットの精巣上体尾部精子におけるMC41抗原をTriton X-100とSDSで抽出した。精製した抗原を二次元電気泳動で展開して分離した結果、Silver染色によりウエスタンブロット陽性スポットに一致する抗原スポットを検出できた。抗原の等電点は極めて酸性側にありpI3付近であった。しかし、CBB染色では明瞭なスポットを確認できなかった。そのため、今回は質量分析装置を用いてMC41抗原分子のアミノ酸配列を決定するには至らなかった。今後、量の問題(実質的な量と検出技術両面の問題)を解決すれば所期の目的を達成できると考えている。
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