| 研究課題/領域番号 |
17590242
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
医化学一般
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| 研究機関 | 金沢大学 |
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研究代表者 |
棚橋 浩 金沢大学, がん研究所, 助手 (90236654)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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| 研究課題ステータス |
完了 (2006年度)
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| 配分額 *注記 |
3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
2006年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
2005年度: 2,300千円 (直接経費: 2,300千円)
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| キーワード | 認知症 / 転写制御 / 神経変成疾患 / Fe65L2 / アルツハイマー病 / BACE / プロテアゾーム / nonsense-mediated mRNA decay / プロテオゾーム / NMD |
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| 研究概要 |
1、APP結合蛋白Fe65L2と結合する蛋白を酵母ツーハイブリッド法によりスクリーニングしたところ、RNAポリメラーゼ2の大サブユニット(RPB1)の特異的な7アミノ酸52回繰り返し配列を含むC端(CTD)を含むクローンが得られた。GSTプルダウン実験及びFe65L2を強制発現させた細胞抽出液と燐酸化状態特異的な抗RPB1抗体を用いた免疫沈降実験によりFe65L2は、RPB1 CTDの非燐酸化フォームと優先的に結合する事が解った。またFe65、Fe65L2が転写に及ぼす影響をFe65、Fe65L2とGAL4のDNA結合領域を持ったコンストラクトとGAL4依存性レポータージーンを培養細胞で一過性発現させることにより調べたところ、Fe65では、GAL4依存的に転写の活性化が見られたが、Fe65L2では、むしろ転写の抑制が見られた。このようにFe65L2は校内でRNAポリメラーゼ2と複合体を形成し転写の制御を行っている可能性が示唆された。2、AD発症と相関のあったFe65L2の多型c954C→Tを含むDNAプローブに結合する核蛋白の存在がゲルシフトアッセイにより示唆された。3、APPを過剰発現するHEK293にPS2結合蛋白DRALを強制発現させるとAPPの発現には有為な差は見られなかったが分泌されるAβの減少、分泌型APPの増加が見られ、DRALがAPPの代謝に影響を及ぼす可能性が示唆された。4、nonsense mediated mRNA decay(NMD)により制御を受ける新たなBACEのアイソフォームを同定した。そのmRNAは僅かであるがヒト脳に存在していた。たとえこのアイソフォームを細胞に発現させても不安定であり、プロペプチドは除かれず、ERに留まりプロテアゾーム依存的に分解された。細胞内では、このアイソフォームが生じないように質的な制御がされているものと思われる。
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