研究課題
基盤研究(C)
消化管上皮細胞の増殖・分化にはHepatocyte Growth Factor (HGF)が大きな役割を果たしており、HGFの消化管上皮局所での活性化に、特異的活性化因子であるHGF Activator (HGFA)による限定分解が必要で、そのHGFAの活性調節には膜結合型インヒビターであるHGF activator inhibitor (HAI)が重要な働きをしている。さらにHAI-2遺伝子の11kb下流にアミノ酸106個からなる新規核移行ペプチドHAI-2 Related Small Peptide (H2RSP)が存在し、in vitroの解析で核に移行するペプチドであることが明らかとなっている。今回の研究では、これらこれまでの我々の研究成果をさらに発展させるため、まずH2RSP-GST癒合蛋白質を大腸菌培養によって大量に作成し、それを用いて抗H2RSP抗体を作成し、様々な組織(消化管正常および炎症性、腫瘍性疾患)でのH2RSPの局在を免疫組織学的、さらにIn situ hibridization法を用いて解析した。また免疫沈降法を用いて、H2RSPに結合する蛋白や核酸の検索を行った。その結果、消化管の癌細胞や、再生中の上皮細胞ではH2RSPは核に移行せずに細胞質に留まっており、消化管上皮細胞の増殖・分化にH2RSPが大きな役割を果たしていることを明らかにし、特にマウスモデルを使った研究で、H2RSPは傷害を受け再生中の消化管上皮細胞では核に移行せずに細胞質に留まっており、消化管上皮細胞の増殖・分化にH2RSPが大きな役割を果たしていることを報告した。また、大腸癌の浸潤先端ではH2RSPとP16蛋白の局在が、ほば完全に一致し、これらの蛋白の関連性が示唆され、H2RSPと結合する核酸としてPoly Gを含むリボゾームRNAが候補であることを明らかにした。さらに、HGFAやHAI-2とH2RSPとの関連を明らかにするため、機能的なリコンビナントHGFA、HAI-2、H2RSPを作成する目的で、昆虫細胞を用いた大量培養を行うため、それぞれの蛋白の機能ドメインに変異を入れたコンストラクトを構築した。
すべて 2007 2006
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Gut 56
ページ: 215-226
Virchows Arch 448
ページ: 354-360
VirchowsArch. 448
Virchows Arch 448(3)
