EBウイルス陽性癌に対する特異的T細胞免疫応答の研究

• 研究課題/領域番号: 17590428
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: ウイルス学
• 研究機関: 愛知県がんセンター(研究所)
• 研究代表者: 葛島 清隆 愛知県がんセンター(研究所), 腫瘍免疫学部, 部長 (30311442)
• 研究分担者: 伊藤 嘉規 愛知県がんセンター(研究所), 腫瘍免疫学部, 主任研究員 (20373491)
• 研究期間 (年度): 2005 – 2006
• 研究課題ステータス: 完了 (2006年度)
• 配分額: 3,500千円 (直接経費: 3,500千円); 2006年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円); 2005年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
• キーワード: EBウイルス / 抗原特異的CD4陽性T細胞 / EBNAI / HLA / リンパ腫 / 細胞傷害性Tリンパ / ヘルパーT細胞 / EBNA / 細胞傷害性Tリンパ球 / 胃癌 / 上咽頭癌 / ホジキンリンパ腫

研究概要

【目的と意義】
Epstein-Barrvirus(EBV)の核抗原であるEBNA1はEBV陽性癌に共通して発現している蛋白質である。EBNA1を標的抗原として活用できれば、すべてのEBV陽性癌に対して有効な免疫療法が構築できる可能性がある。また、効率的な腫瘍免疫応答には、CD8陽性のCTLのみならず抗原特異的なCD4+T細胞の動員が重要であることが指摘されている。今年度はEBNA1特異的CD4-T細胞を誘導し、その認識エピトープ及び機能を解析した。
【材料と方法】
EBNA1のC末端側の約200アミノ酸をカバーするオーバーラッピングペプチドを用いてEBV既感染成人末梢血単核球を繰り返し刺激した後、限界希釈法にてCD4^+T細胞クローンを樹立した。抗HLA抗体によるブロッキング実験と既知のHLAを保有するLCLパネルに対する反応性から拘束分子を決定した。エピトーブと推定される配列を含む、11ないし13アミノ酸から成るペプチドを合成し、エピトープを決定した。
【結果と考察】
4株のCD4^+T細胞クローンを樹立し、いずれも異なるエピトープを認識していた。そのうちの1つはDR*0401によって提示される新規エピトープであった。他の3株のクローンは既知のエピトープ領域を認識していたが、拘束分子は報告されているHLAと異なり、DR51、DP2、DQ6であった。これらHLAの日本人における保有率は、DR*0401が10%、DR51が20%、DP2が30%、DQ6が20%であり、EBV陽性癌に対する免疫応答解析と治療応用に有用なものであると考えられる。DR51拘束性クローンは、EBV陽性T/NKリンパ腫から樹立された細胞株に対して傷害活性を示した。CD4^+T細胞をヘルパーとしてのみならずエフェクターとして利用できる可能性が示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] Full-length EBNA1-mRNA-transduced dendritic cells stimulate CTLs recognizing a novel HLA-Cw*0303 and Cw*0304-restricted epitope on EBNA1-expressing cells. (2007)
  • 著者名/発表者名: Ito Y.
  • 雑誌名: J Gen Virol. 88(Pt 3) ページ: 770-780
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Identification of an HLA-A24-restricted cytotoxic T lymphocyte epitope from human papillomavirus type-16 E6 : the combined effects of bortezomib and interferon-γ on the presentation of a cryptic epitope. (2007)
  • 著者名/発表者名: Morishima S.
  • 雑誌名: Int J Cancer. 120(3) ページ: 594-604
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Full-length EBNA1-mRNA-transduced dendritic cells stimulate CTLs recognizing a novel HLA-Cw^*0303 and Cw^*0304-restricted epitope on EBNA1-expressing cells. (2007)
  • 著者名/発表者名: Ito Y, Demachi-Okamura, A, Ohta R, Akatsuka Y, Nishida K, Tsujimura K, Morishima Y, Takahashi T, Kuzushima K.
  • 雑誌名: J Gen.Virol. 88(Pt 3) ページ: 770-80
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Identification of an HLA-A24-restricted cytotoxic T lymphocyte epitope from human papillomavirus type-16 E6 : The combined effects of bortezomib and interferon-gamma on the presentation of a cryptic epitope. (2007)
  • 著者名/発表者名: Morishima S, Akatsuka Y, Nawa A, Kondo E, Kiyono T, Torikai H, Nakanishi T, Ito Y, Tsujimura K, Iwata K, Ito K, Kodera Y, Morishima Y, Kuzushima K, Takahashi T
  • 雑誌名: Int J Cancer. 120 ページ: 594-604
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Full-length EBNA1-mRNA-transduced dendritic cells stimulate CTLs recognizing a novel HLA-Cw*0303 and Cw*0304-restricted epitope on EBNA1-expressing cells. (2007)
  • 著者名/発表者名: Ito Y
  • 雑誌名: J Gen Virol. 88(Pt 3) ページ: 770-80
• [雑誌論文] Epstein-Barr virus (EBV) latent membrane protein l-specific cytotoxic Tlymphocytes targeting natural killer cell malignancies carrying EBV. (2006)
  • 著者名/発表者名: Demachi-Okamura A.
  • 雑誌名: Eur J Immunol. 36(3) ページ: 593-602
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Three Immunoproteasome-Associated Subunits Cooperatively Generate a CTL Epitope of the EBV LMP2A by Overcoming Specific Structures Resistant to Epitope Liberation. (2006)
  • 著者名/発表者名: Ito Y.
  • 雑誌名: J Virol. 80(2) ページ: 883-890
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Bone marrow may be a reservoir of long-lived memory T cells specific for minor histocompatibility antigen. (2006)
  • 著者名/発表者名: Akatsuka Y.
  • 雑誌名: Br J Haematol. 135(3) ページ: 413-414
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] The human cathepsin H gene encodes two novel minor histocompatibility antigen epitopes restricted by HLA-A*3101 and -A*3303. (2006)
  • 著者名/発表者名: Torikai H.
  • 雑誌名: Br J Haematol. 134(4) ページ: 406-416
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Epstein-Barr virus (EBV) latent membrane protein 1-specific cytotoxic T lymphocytes targeting natural killer cell malignancies carrying EBV. (2006)
  • 著者名/発表者名: Demachi-Okamura, A., Ito, Y., Akatsuka, Y., Tsujimura, K., Morishima, Y., Takahashi, T., Kuzushima, K.
  • 雑誌名: Eur.J.Immunol 36(3) ページ: 593-602
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Three Immunoproteasome-Associated Subunits Cooperatively Generate a CTL Epitope of the EBV LMP2A by Overcoming Specific Structures Resistant to Epitope Liberation. (2006)
  • 著者名/発表者名: Ito, Y., Kondo, E., Demachi-Okamura, A., Akatsuka, Y., Tsujimura, K., Tanimoto, M., Morishima, Y., Takahashi, T., Kuzushima, K.
  • 雑誌名: J Virol 80(2) ページ: 883-890
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Bone marrow may be a reservoir of long-lived memory T cells specific for minor histocompatibility antigen. (2006)
  • 著者名/発表者名: Akatsuka Y, Torikai H, Inamoto Y, Tsujimura K, Morishima Y, Kodera Y, Kuzushima K, Takahashi T
  • 雑誌名: Br J Haematol 135(3) ページ: 413-414
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] The human cathepsin H gene encodes two novel minor histocompatibility antigen epitopes restricted by HLA-A^*3101 and-A^*3303. (2006)
  • 著者名/発表者名: Torikai H, Akatsuka Y, Miyazaki M, Tsujimura A, Yatabe Y, Kawase T, Nakao Y, Tsujimura K, Motoyoshi K, Morishima Y, Kodera Y, Kuzushima K, Takahashi T
  • 雑誌名: Br J Haematol 134(4) ページ: 406-416
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Epstein-Barr virus (EBV) latent membrane protein 1-specific 1-specific cytotoxic T lymphocytes targeting natural killer cell malignancies carrying EBV. (2006)
  • 著者名/発表者名: Demachi-Okamura A.
  • 雑誌名: Eur J Immunol. 36(3) ページ: 593-602
• [雑誌論文] Therr Immunoproteasome-Associated Subunits Cooperatively Generate a CTL Epitope of the EBV LMP2A by Overcoming Specific Structures Resistant to Epitope Liberation. (2006)
  • 著者名/発表者名: Ito Y.
  • 雑誌名: J Virol. 80(2) ページ: 883-90
• [雑誌論文] Epstein-Barr virus (EBV) latent membrane protein-1-specific cytotoxic T lymphocytes targeting EBV-carrying natural killer cell malignancies. (2006)
  • 著者名/発表者名: Demachi-Okamura A.
  • 雑誌名: Eur J Immunol. (2006 Feb 14;[Epub ahead of print])
• [雑誌論文] Three immunoproteasome-associate subunits cooperatively generate a cytotoxic T-lymphocyte epitope of Epstein-Barr virus LMP2A by overcoming specific structures resistant to epitope liberation. (2006)
  • 著者名/発表者名: Ito Y.
  • 雑誌名: J Virol. 80(2) ページ: 883-890
• [雑誌論文] Differences between T Cell-Type and Natural Killer Cell-Type Chronic Active Epstein-Barr Virus Infection. (2005)
  • 著者名/発表者名: Kimura H, Hoshino Y, Hara S, Sugaya N, Kawada J, Shibata Y, Kojima S, Nagasaka T, Kuzushima K, Morishima T
  • 雑誌名: J.Infect.Dis. 191(4) ページ: 531-539
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Retroviral vector backbone immunogenicity : identification of cytotoxic T-cell epitopes in retroviral vector-packaging sequences. (2005)
  • 著者名/発表者名: Kondo E, Akatsuka Y, Nawa A, Kuzushima K, Tsujimura K, Tanimoto M, Kodera Y, Morishima Y, Kuzuya K, Takahashi T
  • 雑誌名: Gene Ther. 12(3) ページ: 252-258
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Generation of tumor-specific, HLA class I-restricted human Th1 and Tc1 cells by cell engineering with tumor peptide-specific T-cell receptor genes. (2005)
  • 著者名/発表者名: Tsuji, T., Yasukawa, M., Matsuzaki, J., Ohkuri, T., Chamoto, K., Wakita, D., Azuma, T., Niiya, H., Miyoshi, H., Kuzushima.K., Oka, Y., Sugiyama, H., Ikeda, H., Nishimura, T.
  • 雑誌名: Blood. 106(2) ページ: 470-476
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Differences between T cell-type and natural killer cell-type chronic active Epstein-Barr virus infection. (2005)
  • 著者名/発表者名: Kimura H.
  • 雑誌名: J Infect Dis. 191(4) ページ: 531-539