ベータセルリン受容体のクローニングと新規糖尿病治療法の開発

• 研究課題/領域番号: 17590915
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 代謝学
• 研究機関: 群馬大学
• 研究代表者: 岡田 秀一 群馬大学, 医学部, 講師 (20260474)
• 研究期間 (年度): 2005 – 2007
• 研究課題ステータス: 完了 (2007年度)
• 配分額: 3,810千円 (直接経費: 3,600千円、間接経費: 210千円); 2007年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円); 2006年度: 700千円 (直接経費: 700千円); 2005年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
• キーワード: 再生医療 / ベータセルリン / EGF / 再生医学 / シグナル伝達 / 移植・再生医療 / 糖尿病 / 内科

研究概要

べータセルリン(BTC)受容体のクローニングを目指した。
1.BTC(1-80)とBTC(24-76)を作製・精製しそれぞれのカラムを作成した。BTC受容体を発現していると思われるIEC-6細胞の膜分画を抽出しカラムにapplyした。BTC(1-80)またはBTC(24-76)に対する結合蛋白をカラムより回収しSDS-PAGEに展開し複数のbandを回収した。質量分析法を用いてシークエンスを明らかにし、databaseより分子を同定する作業を進めた結果、キナーゼドメインを有し受容体構造を持つクローンとしてEGF受容体(EGFR)を得た。現時点では、BTCはEGF受容体を利用していると推測された。では、BTCとEGFの生理作用の違いは何に由来するのであろうか?
我々の検討では、BTCとEGFとではEGFRの活性化の程度が同一ではなく、細胞内の分子の燐酸化の程度もことなる部分が存在することが明らかとなった。そこで、BTCに特徴的な生理作用は細胞内シグナルの違いに由来する可能性が考えられた。
2.βHC9細胞をBTCまたはEGFで刺激しphosphotyrosine抗体でチロシン残基が燐酸化を受けている分子を回収した。そして、BTC刺激で燐酸化を受けるがEGF刺激では燐酸化を受けない分子に注目しクローニングを試みた。質量分析法を組み合わせて解析を行った。その結果、phospholipase D active site motifを有し、DEDDDDDYVTLSDODなるEGFR kinaseで燐酸化される部位が存在する新規分子をクローニングした。PLD2→PA(phosphatidic acid)→Sos PH domain→Sosをmembraneへrecruite→Rasを活性化なるシグナルで細胞増殖に関わっている分子と推測をされた。

研究成果

• [雑誌論文] Tyrosine phosphorylation of Munc18c regulates PDGF-stimulated. (2008)
  • 著者名/発表者名: Umahara M, Okada S et. Al.
  • 雑誌名: Eudocrinology 149 ページ: 40-49
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Tyrosine phosphorylation of Muncl8c regulates PDGF-stimulated Glut4 translocation in 3T3L1 adipocytes (2008)
  • 著者名/発表者名: Umahara M, Okada S, et. Al.
  • 雑誌名: Endocrinology 149 ページ: 40-49
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Tyrosine phosphorylation of Munc18c regulates PDGF-stimulated (2008)
  • 著者名/発表者名: Umahara M, Okada S, et. al.
  • 雑誌名: Endocrinology 149 ページ: 40-49
  • 査読あり
• [雑誌論文] Synip Phosphorylation is required for insulin-stimulated Glut4. (2007)
  • 著者名/発表者名: Okada S, et
  • 雑誌名: Biochem. Biophys. Res. Commun. 356 ページ: 102-106
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Synip phosphorylation is required for insulin-stimulated Glut4 translocation (2007)
  • 著者名/発表者名: Okada S, et. al.
  • 雑誌名: Biochem. Biophys. Res. Commun 356 ページ: 102-106
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Synip phosphorylation is required for insulin-stimUlated Glut4 (2007)
  • 著者名/発表者名: Okada S, et. al.
  • 雑誌名: Biochem.Biophys.Res.Commun 365 ページ: 102-106
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of nesfatin-1 as a satiety molecule in the hypothalamus. (2006)
  • 著者名/発表者名: Oh-i, S, Okada S, et al.
  • 雑誌名: Nature 443 ページ: 709-712
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of nesfatin-1 as a satiety molecule in the hypothalamus (2006)
  • 著者名/発表者名: Oh-i, S, Okada S, et. al.
  • 雑誌名: Nature 443 ページ: 709-712
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Pioglitazone increases circulating adiponecctin levels and subsequently reduces TNF-alpha levels in Type 2 diabetic patients : a randomized study. (2006)
  • 著者名/発表者名: Hiroyuki Shimizu, Shhinsuke Oh-I, Takafumi Tsuchiya, Kenichi Ohtani, Shuichi Okada, Masatomo Mori
  • 雑誌名: Diabet Med. 23 ページ: 253-257
• [雑誌論文] Identification of nesfatin-1 as a satiety molecule in the hypothalamus. (2006)
  • 著者名/発表者名: Shinsuke Oh-I, Hiroyuki Shimizu, Tetsurou Satoh, Shuichi Okada, Sachika Adachi, Kinji Inoue, Hiroshi Eguchi, Masanori Yamamoto, Toshihiro Imaki, Koushi Hashimoto, Takafumi Tsuchiya, Tsuyoshi Monden, Kazuhiko Horiguchi, Masanobu Yamada, Masatomo Mori
  • 雑誌名: Nature 443 ページ: 709-712
• [学会発表] Cdk5 negatively regulates Glut4 translocation through TC10. (2007)
  • 著者名/発表者名: Okada S, et. al.
  • 学会等名: 67th Scientific session
  • 発表場所: Chicago, IL, USA
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] Cdk5 negatively regulates Glut4 translocation through TCI0 phosphorylation (2007)
  • 著者名/発表者名: Okada S, et. al.
  • 学会等名: 67th Scientific session
  • 発表場所: Chicago, IL USA
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [学会発表] Cdk5 negatively regulates Glut4 transloeation through TC10 (2007)
  • 著者名/発表者名: Okada S, et. al.
  • 学会等名: 67th Scientific session
  • 発表場所: Chicago,IL,USA