| 研究課題/領域番号 |
17590939
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
代謝学
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| 研究機関 | 愛媛大学 |
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研究代表者 |
牧野 英一 愛媛大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (50009578)
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| 研究分担者 |
大澤 春彦 愛媛大学, 大学院・医学系研究科, 助教授 (90294800)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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| 研究課題ステータス |
完了 (2006年度)
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| 配分額 *注記 |
3,400千円 (直接経費: 3,400千円)
2006年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
2005年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
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| キーワード | PDE3B / 脂肪細胞 / インスリン / 燐酸化 / インスリン抵抗性 / 相互作用 |
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| 研究概要 |
本研究は、PDE3Bに相互作用しインスリンによりリン酸化されるp50のクローニングおよびそのその解析を目的とし、そのアプローチとしては1)yeast two-hybridにて既に得られている候補クローンの網羅的解析、2)燐酸化p50の分離、質量分析による同定を計画した。
平成工8年度は、平成17年度に引き続き、yeast two-hybridにて既に得られている候補クローンの解析を主に行った。平成17年度にyeast two-hybridの2次スクリーニングおよびin vitroのreticulocyte lysateで合成した^<35>S標識PDE3Bを用いたGST pull downによりPDE3Bとの相互作用を確認した11クローンについて、ラット脂肪細胞の内因性PDE3Bとの相互作用の解析を行った。これら11クローンそれぞれのGST融合蛋白およびラット副睾脂肪細胞の可溶化膜分画を用いGST pull downを行い、抗PDE3B抗体を用いたWestern blot法ににより相互作用を検討した。その結果、11クローン中、キナーゼおよび転写因子を含む7クローンでラット脂肪細胞の内因性PDE3Bとのin vitroでの相互作用が確認された。
さらに、11クローンについてそれぞれの蛋白に対する抗体を、GST融合蛋白をウサギに免疫することにより作成した。これちの抗体を用いて、得られたクローンの脂肪細胞内でのPDE3Bとの内因性の相互作用について、免役沈降法、Western blot法により、一部を解析した。
本研究により、p50の候補としてキナーゼおよび転写因子を含む7クローンを限定した。さらに、本研究によりPDE3Bはp50および我々がすでに報告した14-3-3β以外に複数の蛋白と相互作用することが示唆された。
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