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新たに同定したPDE3B結合性リン酸化蛋白のクローニングと機能解析

研究課題

研究課題/領域番号 17590939
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 代謝学
研究機関愛媛大学

研究代表者

牧野 英一  愛媛大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (50009578)

研究分担者 大澤 春彦  愛媛大学, 大学院・医学系研究科, 助教授 (90294800)
研究期間 (年度) 2005 – 2006
研究課題ステータス 完了 (2006年度)
配分額 *注記
3,400千円 (直接経費: 3,400千円)
2006年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
2005年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
キーワードPDE3B / 脂肪細胞 / インスリン / 燐酸化 / インスリン抵抗性 / 相互作用
研究概要

本研究は、PDE3Bに相互作用しインスリンによりリン酸化されるp50のクローニングおよびそのその解析を目的とし、そのアプローチとしては1)yeast two-hybridにて既に得られている候補クローンの網羅的解析、2)燐酸化p50の分離、質量分析による同定を計画した。
平成工8年度は、平成17年度に引き続き、yeast two-hybridにて既に得られている候補クローンの解析を主に行った。平成17年度にyeast two-hybridの2次スクリーニングおよびin vitroのreticulocyte lysateで合成した^<35>S標識PDE3Bを用いたGST pull downによりPDE3Bとの相互作用を確認した11クローンについて、ラット脂肪細胞の内因性PDE3Bとの相互作用の解析を行った。これら11クローンそれぞれのGST融合蛋白およびラット副睾脂肪細胞の可溶化膜分画を用いGST pull downを行い、抗PDE3B抗体を用いたWestern blot法ににより相互作用を検討した。その結果、11クローン中、キナーゼおよび転写因子を含む7クローンでラット脂肪細胞の内因性PDE3Bとのin vitroでの相互作用が確認された。
さらに、11クローンについてそれぞれの蛋白に対する抗体を、GST融合蛋白をウサギに免疫することにより作成した。これちの抗体を用いて、得られたクローンの脂肪細胞内でのPDE3Bとの内因性の相互作用について、免役沈降法、Western blot法により、一部を解析した。
本研究により、p50の候補としてキナーゼおよび転写因子を含む7クローンを限定した。さらに、本研究によりPDE3Bはp50および我々がすでに報告した14-3-3β以外に複数の蛋白と相互作用することが示唆された。

報告書

(3件)
  • 2006 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 2005 実績報告書
  • 研究成果

    (3件)

すべて 2005

すべて 雑誌論文 (3件)

  • [雑誌論文] A newly identified 50 kDa protein which is associated with phosphodiesterase 3B is phosphorylated by insulin in rat adipocytes.2005

    • 著者名/発表者名
      Onuma, H., Osawa, H, Makino, H.et al.
    • 雑誌名

      Biochem Biophys Res Commun 337

      ページ: 976-982

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2006 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] A newly identified 50 kDa protein which is associated with phosphodiesterase 3B is phosphorylated by insulin in rat adipocytes.2005

    • 著者名/発表者名
      Onuma, H., Osawa, H., Makino, H., et al.
    • 雑誌名

      Biochem Biophys Res Commun 337

      ページ: 976-982

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2006 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] A newly identified 50kDa protein which is associated with phosphodiesterase 3B is phosphorylated by insulin in rat adipocytes.2005

    • 著者名/発表者名
      Onuma, H., Osawa, H., Makino, H.et al.
    • 雑誌名

      Biochem Biophys Res Commun 337

      ページ: 976-982

    • 関連する報告書
      2005 実績報告書

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公開日: 2005-04-01   更新日: 2016-04-21  

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