| 研究課題/領域番号 |
17591003
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
血液内科学
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| 研究機関 | 札幌医科大学 |
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研究代表者 |
小船 雅義 札幌医科大学, 医学部, 助手 (90336389)
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| 研究分担者 |
加藤 淳二 札幌医科大学, 医学部, 助教授 (20244345)
河野 豊 札幌医科大学, 医学部, 研究員 (80398320)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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| 研究課題ステータス |
完了 (2006年度)
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| 配分額 *注記 |
3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
2006年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
2005年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
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| キーワード | 臍帯血 / ストローマ / CXCR4 / CD34陰性細胞 / 造血幹細胞 |
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| 研究概要 |
lineage(Lin)negative(-)/CD34-臍帯血の分離法を確立した。臍帯血から単核球分離を行い、抗Lin抗体およびCD34マグネット・ビーズでnegative selectionによりLin-CD34-細胞を分離した。まず、ヒトストローマ細胞との共培養に用いるLin-CD34-細胞数の至適量を決定したところ、Lin-CD34-細胞500,000個を2週間共培養した際に、最も高率にCD34陽性細胞が誘導されることが明らかとなった。2週間の共培養後の総細胞数は685±94(x10^3)に過ぎなかったが、156±16(x10^3)のCD34陽性細胞が認められた。また、CFU-Cは共培養前の0.7±0.2(x10^3)から120±35(x10^3)まで著増し、CFU-Mixは共培養前の50±41から6513±3791まで著増した。また、ヒトストローマ細胞とLin-CD34-細胞を共培養することで、CXCR4も発現してくることが明らかとなった。さらに共培養後の造血細胞をCD34陽性分画と陰性分画に分けて解析した結果、CD34陽性分画にほとんどの未分化コロニー形成細胞が存在していることが確認された。つぎに、造血幹細胞分画について、NOD/SCID/IL2R_chain nullマウスを用いて検討をおこなった。まず、共培養前および共培養後の2_10^6の造血細胞をCFSEで蛍光標識し、マウスのtail veinから静注した24時間後に、骨髄へのhomingが認められるか否か検討した。その結果、共培養前のLin-CD34-細胞を移植した際には全くヒト造血細胞が検出されなかったのにも係わらず、共培養後の造血細胞を移植した場合には約2.5-3.0%のヒト造血細胞が検出された。さらに、このヒト造血細胞のhomingは移植造血細胞を抗CXCR4中和抗体で処理することで激減することから、共培養後の造血細胞におけるCXCR4の発現より制御されている可能性が推定された。つぎに、共培養前および共培養後の造血細胞を移植した際に骨髄再建が認められるか検討した。共培養前のLin-CD34-細胞を移植した場合には全く骨髄再建が認められなかったのにも係わらず、共培養後のLin-CD34-細胞を移植した場合には、24週でCD33陽性細胞およびCD19陽性細胞が多数検出され、少量ながらCD3陽性細胞が検出された。さらに骨髄および脾臓の解析でNK細胞およびT細胞のprecursor細胞が認められた。また、脾臓においてIgM陽性B細胞が検出された。すなわちヒトストローマ細胞とLin-CD34-細胞を共培養することは、造血前駆細胞を増幅するのみならず、造血幹細胞の生着を促進することが明らかとなった。
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