研究課題
基盤研究(C)
単一遺伝子異常に起因して骨髄細胞のいずれかの系列の細胞増殖が低下しており、正常な遺伝子の導入により細胞の分化増殖が正常化すると予想される疾患を対象として、遺伝子治療へ向けた遺伝子導入システムと導入された骨髄細胞の機能評価システムを確立することを目的とし研究を進めた。先天性好中球減少症を対象疾患とし、glucose 6-translocase(G6PT)遺伝子異常に起因する、糖原病1b型に合併する好中球低下症、好中球機能不全の改善を目的とした研究を行った。まず、G6PT遺伝子発現Lentivirus vector(pCS-CDF-ChG6PT-PRE)を作成しウイルスタイターを測定した。次に健常臍帯血由来のCD34陽性細胞を分離し、Lentivirus vectorによるG6PT遺伝子ならびにGFP遺伝子の細胞導入を行った。導入後にMethylcellulose培地コロニー形成能を観察した結果、遺伝子導入効率は約10%ほどであった。最後にインフォームドコンセントを得た糖原病Ib型の患者より骨髄細胞を採取後、CD34陽性細胞を精製しGFP遺伝子あるいはG6PT遺伝子を導入した。そしてMethylcellulose colony assayにて培地上のコロニーの形成状態を観察し、G-CFU,GM-CSF,M-CSF,E-BFUの数を調べ、血球の各lineage形成能を調べた。また、メチルセルロース培地にて培養後に形成されたG-CFU,GM-CSF,M-CSF,E-BFUのそれぞれのコロニーより細胞を回収後、コロニーPCRにて遺伝子の導入効率を算定した。結果として遺伝子導入効率が低く(約10%程度)、導入条件や培養条件等を検討したが研究期間中には条件の最適化が完了できなかったため、引き続き研究を継続中である。
すべて 2008 2007 2006 2005 その他
すべて 雑誌論文 (28件) (うち査読あり 14件) 学会発表 (17件)
Pediatrics 121
Pediatric Research Feb;63(2)
ページ: 182-5
Human Genetics 121(2)
ページ: 223-232
Clinical Endocrinology 67
ページ: 212-217
40016612565
Journal of Human Genetics 52(12)
ページ: 1040-1043
Hum Genet. 121(2)
ページ: 223-32
Clin Endocrinol. 67
J Hum Genet. 52(12)
ページ: 1040-3
10020022418
Int J Immunogenet 33(1)
ページ: 7-10
Diabetic Med 23(10)
ページ: 1145-50
Am J Neuroradiol 27(9)
ページ: 1924-6
Diabetic Med. 23(10)
Am J Neuroradiol. 27(9)
International Journal of Immunogenetics 33(1)
Pediatr Transplant 9(1)
ページ: 101-103
J Mol Med 83(4)
ページ: 316-320
J Inherit Metab Dis 28(5)
ページ: 681-687
Exp Hematol 33
ページ: 1215-1221
Pediatr Res. (in press)
Pediatrics. (in press)
