ウィルソン病等における血中セルロプラスミン分子の構造解析

• 研究課題/領域番号: 17591125
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 小児科学
• 研究機関: 久留米大学
• 研究代表者: 渡辺 順子 (渡邊 順子) 久留米大学, 医学部, 講師 (40258489)
• 研究分担者: 芳野 信 久留米大学, 医学部, 教授 (40080569) ; 原田 英明 久留米大学, 医学部, 助教 (90309790)
• 研究期間 (年度): 2005 – 2007
• 研究課題ステータス: 完了 (2007年度)
• 配分額: 3,740千円 (直接経費: 3,500千円、間接経費: 240千円); 2007年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円); 2006年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円); 2005年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
• キーワード: セルロプラスミン / ペプチド解析 / 低セルロプラスミン血症 / ウィルソン病 / MALDI-TOF-MS / 質量分析

研究概要

低セルロプラスミン血症および健常者由来の血清から分離したセルロプラスミン複合物を用い、二次元電気泳動を行った。低セルロプラスミン血症で確認されたナンセンス変異による低分子のペプチドがゲルイメージ上の相違として確認できることを予測したが、両者の比較の結果、違いは認めなかった。またセルロプラスミンの低値を認めるがセルロプラスミンの遺伝子異常ではないウィルソン病患者の検体でも同様の比較を行ったが同じく、健常者のゲルイメージとの相違は認めなかった。
次に、各々の血清を二次元電気泳動後のゲルから該当するバンドを抽出しMALDI-TOF-MS解析をおこなったが、それぞれの疾患に特異的な質量を示す分画は認めなかった。少なくとも低セルロプラスミン血症では遺伝子レベルでナンセンス変異を同定されているにもかかわらず、MALDI-TOF-MS解析でのペプチド構造解析では異常が認められなかった。これは、純品のペプチドピークの検出率が19%にとどまったことから変異部位がペプチドピークとして検出されなかった故と考えられた。また、遺伝子レベルでの変異を確認できていないもう一方のアレルでの変異を蛋白レベルで同定することもできなかった。ウイルソン病では、糖鎖付加の変化などの翻訳後修飾によるゲルイメージおよびペプチドピークの変化を予測したが実際には変化を認めなかった。この原因として、ウイルソン病では翻訳後修飾を受けていないまたはペプチドピークの検出範囲には変化が存在しなかった可能性を考える。
ヒト由来のセルロプラスミン純品試薬のペプチドピークの検出率が19%であることから、変異部位または異なる修飾を受ける部位がこの範囲にない場合には、MALDI-TOF-MSでは変異蛋白または異常蛋白と正常蛋白との差が有意に検出するには限界があると考えられた。

研究成果

• [雑誌論文] Paternal transmission and slow elimination of mutant alleles associated with late-onset ornithine transcarbamylase deficiency in male patients (2008)
  • 著者名/発表者名: Numata S, Harada E, Maeno Y, Ueki I, Watanabe Y, Fujii C, Yanagawa T, Takenaka S, Inoue T, Inoue S, Goushi T, Yasutake T, Mizuta T, Yoshino M
  • 雑誌名: J Hum Genet 53 ページ: 10-17
  • NAID: 10021247384
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Paternal transmission and slow elimination of mutant alleles associated with late-onset ornithine transcarbamylase deficiency in male patients. (2008)
  • 著者名/発表者名: Numata S, Harada E, Maeno Y, Ueki I, Watanabe Y, Fujii C, Yanagawa T, Takenaka S, Inoue T, Inoue S, Goushi T, Yasutake T, Mizuta T, Yoshino M.
  • 雑誌名: J Hum Genet 53(doi ; 10.1007/s10038-007-0212-8) ページ: 10-17
  • NAID: 10021247384
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Paternal transmission and slow elimination of mutant allelesassociated with late-onset ornithine transcarbamylase deficiencyin male patients (2008)
  • 著者名/発表者名: Numata S, Harada E, Maeno Y, Ueki I, Watanabe Y, Fujii C, Yanagawa T, Takenaka S, Inoue T, Inoue S, Goushi T, Yasutake T, Mizuta T, Ybshino M
  • 雑誌名: J Hum Genet 53 ページ: 10-17
  • 査読あり
• [雑誌論文] Roles of specific cytokines in bone remodeling and hematopoiesis in Gaucher disease (2007)
  • 著者名/発表者名: Yoshino M, Watanabe Y, Tokunaga Y, Harada E, Fujii C, Numata S, Harada M, Tajima A, Ida H
  • 雑誌名: Pediatr Int 49 ページ: 959-965
  • NAID: 10024152088
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Novel mutations in five Japanese patients with 3-methylcrotonyl-CoA carboxylase deficiency (2007)
  • 著者名/発表者名: Uematsu M, Sakamoto O, Sugawara N, Kumagai N, Morimoto T, Yamaguchi S, Hasegawa Y, Kobayashi H, Ihara K, Yoshino M, Watanabe Y, Inokuchi T, Yokoyama T, Kiwaki K, Nakamura K, Endo F, Tsuchiya S, Ohura T
  • 雑誌名: J Hum Genet 52 ページ: 1040-1043
  • NAID: 10020022418
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Screening for Alagille syndrome mutations in the JAG1 and NOTCH2 genes using denaturing high-performance liquid chromatography (2007)
  • 著者名/発表者名: Samejima H, Torii C, Kosaki R, Kurosawa K, Yoshihashi H, Muroya K, Okamoto N, Watanabe Y, Kosho T, Kubota M, Matsuda O, Goto M, Izumi K, Takahashi T, Kosaki K
  • 雑誌名: Genet Test 11 ページ: 216-227
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Roles of some cytokines in bone remodeling and hematopoiesis in Gaucher disease. (2007)
  • 著者名/発表者名: Yoshino M, Watanabe Y, Thkunaga Y, Harada E, Fujii C, Numata S, Harada M, Tajima A, Ida H.
  • 雑誌名: Pediatr Int 49(doi : 10.1111/j.1442-200x.2007.02502.x) ページ: 959-956
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Novel mutations in five Japanese patients with 3-methylcrotonyl-C0A carboxylase deficiency. (2007)
  • 著者名/発表者名: Uematsu M, Sakamoto O, Sugawara N, Kumagai N, Morimoto T,Yamaguchi S, Hasegawa Y, Kobayashi H, Ihara K, Yoshino M,Watanabe Y, Inokuchi T, Yokoyama T. Kiwaki K, Nakamura K, Endo F, Tsuchiya S, Ohura T.
  • 雑誌名: J Hum Genet. 52(doi : 10.1007/s10038-007-0211-9) ページ: 1040-1043
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Screening for Alagille syndrome mutations in the JAG1 and NOTCH2 genes using denaturing high-performance liquid chromatography. (2007)
  • 著者名/発表者名: Samejima H,'Ibrii C, Kosaki R, Kurosawa K, Yoshihashi H,Muroya K, Okamoto N, Watanabe Y, Kosho T, Kubota M, Matsuda O, Goto M, Izumi K, Takahashi'F, Kosaki K.
  • 雑誌名: Genet Test 11(doi : 10.1089/gte.2006.0519) ページ: 216-227
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Novel mutations in five Japanese patients with 3-methylcrotonyl-CoAcarboxylase deficiency (2007)
  • 著者名/発表者名: Uematsu M, Sakamoto O, Sugawara N, Kumagai N, Morimoto T, Yamaguchi S, Hasegawa Y, Kobayashi H, Ihara K, Yoshino M, Watanabe Y, Inokuchi T, Yokoyama T, Kiwaki K, Nakamura K, Endo F, Tsuchja S, Ohura T
  • 雑誌名: J Hum Genet 52 ページ: 1040-1043
  • NAID: 10020022418
  • 査読あり
• [雑誌論文] Screening for Alagille syndrome mutations in the JAGl andNOTCH2 genes using denaturing high-performance liquidchromatography (2007)
  • 著者名/発表者名: Samejima H, Torii C, Kosaki R, Kurosawa K, Yoshihashi H, Muroya K, Okamoto N, Watanabe Y, Kosho T, Kubota M, Matsuda O, Goto M, Izumi K, Takahashi T, Kosaki K
  • 雑誌名: Genet Test 11 ページ: 216-227
  • 査読あり
• [雑誌論文] Late-onset ornithine transcarbamylase deficiency in male patients:Prognostic factors and characteristics of plasma amino acid profile (2006)
  • 著者名/発表者名: Harada E, Nishiyori A, Tokunaga Y, Watanabe Y, Kuriya N, Kumashiro R, Kuno T, Kuromaru R, Hirose S, Ichikawa K, Yoshino M
  • 雑誌名: Pediatr Int 48 ページ: 105-111
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Comprehensive genetic analysis of relevant four genes in 49 patients with Marfan syndrome or Marfan-related phenotypes (2006)
  • 著者名/発表者名: Sakai H, Visser R, Ikegawa S, Ito E, Numabe H, Watanabe Y, Mikami H, Kondoh T, Kitoh H, Sugiyama R, Okamoto N, Ogata T, Fodde R, Mizuno S, Takamura K, Egashira M, Sasaki N, Watanabe S, Nishimaki S, Takada F, Nagai T, Okada Y, Aoka Y, Yasuda K, Iwasa M, Kogaki S, Harada N, Mizuguchi T, Matsumoto N
  • 雑誌名: Am J Med Genet A 140・16 ページ: 1719-1725
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Late-onset ornithine transcarbamylase deficiency inmale patients:Prognostic factors and characteristics of plasma amino acid profile. (2006)
  • 著者名/発表者名: Harada E, Nishiyori A, Tokunaga Y, Watanabe Y, Kuriya N,Kumasbiro R, Kuno T, Kuromaru R, Hirose 5, Ichikawa K,Yoshino M.
  • 雑誌名: Pediatr Int 48(doi : 10.1111/j.1442-200x.02181.x) ページ: 105-111
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Comprehensive genetic analysis of relevant fourgenes in 49 patients with Marfan syndrome or Marfan-related phenotypes. (2006)
  • 著者名/発表者名: Sakai H, Visser R, Ikegawa S, Ito E, Numabe H, Watanabe Y, Mikami H, Kondoh T, Kitoh H, Sugiyama R, Okamoto N, Ogata T, Fodde R, Mizuno S, Takamura K, Egashira M, Sasaki N,Watanabe S, Nishimaki S, Takada F, Nagai T, Okada Y, Aoka Y, Yasuda K, Iwasa M, Kogaki S, Harada N, Mizuguchi T, Matsumoto N.
  • 雑誌名: Am J Med GenetA. 140(16)(doi : 10.1002/ajmg.a.31353) ページ: 1719-25
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Late-onset ornithine transcarbamylase deficiency in male patients : Prognostic factors and characteristics of plasma amino acid profile. (2006)
  • 著者名/発表者名: Harada E, Nishiyori A, Tokunaga Y, Watanabe Y, Kuriya N, Kumashiro R, Kuno T, Kuromaru R, Hirose S, Ichikawa K, Yoshino M
  • 雑誌名: Pediatr Int 48 ページ: 105-111
  • NAID: 10018195131
• [雑誌論文] Comprehensive genetic analysis of relevant four genes in 49 patients with Marfan syndrome or Marfan-related phenotypes. (2006)
  • 著者名/発表者名: Sakai H, Visser R, Ikegawa S, Ito E, Numabe H, Watanabe Y, Mikami H, Kondoh T, Kitoh H, Sugiyama R, Okamoto N, Ogata T, Fodde R, Mizuno S, Takamura K, Egashira M, Sasaki N, Watanabe S, Nishimaki S, Takada F, Nagai T, Okada Y, Aoka Y, Yasuda K, Iwasa M, Kogaki S, Harada N, Mizuguchi T, Matsumoto N
  • 雑誌名: Am J Med Genet A 140・16 ページ: 1719-1725
• [雑誌論文] 栄養療法で急性期治療を行ったメープルシロップ尿症の1例 (2006)
  • 著者名/発表者名: 岡田純一郎, 渡辺順子, 平井裕子, 神戸太郎, 廣瀬彰子, 藤野 浩, 前野泰樹, 芳野 信
  • 雑誌名: 日本マススクリーニング学会雑誌 16 ページ: 63-67
• [図書] 小児救急学習用テキスト原著第4版 (2006)
  • 著者名/発表者名: 渡辺順子
  • 総ページ数: 759
  • 出版者: 診断と治療社