| 研究課題/領域番号 |
17591141
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
胎児・新生児医学
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
二宮 伸介 岡山大学, 医学部・歯学部附属病院, 講師 (10325110)
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| 研究分担者 |
田中 弘之 岡山大学, 大学院医歯薬学総合研究科, 助教授 (80231413)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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| 研究課題ステータス |
完了 (2006年度)
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| 配分額 *注記 |
1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
2006年度: 600千円 (直接経費: 600千円)
2005年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
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| キーワード | 羊水細胞 / 染色体 / テロメラーゼ / テロメア長 / テロメラーゼ活性 |
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| 研究概要 |
テロメラーゼ活性の解析に用いる、羊水細胞の調整を行った。培地としてAminioMaxを用い、37℃、5%CO_2の条件下で羊水の細胞培養を開始し1、2、5継代した。継代には0.25%トリプシン液を使用し、培地としてMEM+10%FCSを用いた。細胞数をカウントし、1×10^4個になるように調整し、テロメラーゼ活性を測定するために、ペレットとして。80℃で保存した。羊水細胞6検体に加えて、絨毛細胞を3検体、また胎児由来の皮膚線維芽細胞1検体について同様の処理を行った。
テロメラーゼ活性を定量化するにあたり、検量線を作成する必要がある。そのために、テロメラーゼ活性の高いことが知られているHeLa細胞を用いた。まずHeLa細胞について、2×10^4個になるように調整し、5段階の希釈系列を作成した。テロメラーゼ活性を測定するために、TeloChaser(テロメラーゼ活性測定キット)を使用した。テロメラーゼを含む細胞抽出液を調整し、基質プライマーへテロメア繰り返し配列の付加を行った。精製後リバースプライマーを添加し、PCRを行った。PCR産物をアクリルアミドゲルで泳動し、エチジウムブロマイドで染色した。そして検量線を作成した。
羊水細胞のテロメラーゼ活性についてもTeloChaserを用いて、同様に検討した。正常染色体である6検体の羊水細胞の検討では、テロメラーゼ活性は認められなかった。
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