| 研究課題/領域番号 |
17591404
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
消化器外科学
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
池田 聡 広島大学, 大学院医歯薬学総合研究科, 寄附講座教員 (60397924)
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| 研究分担者 |
岡島 正純 広島大学, 大学院医歯薬学総合研究科, 寄附講座教員 (90274068)
浅原 利正 広島大学, 病院・教授 (70175850)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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| 研究課題ステータス |
完了 (2006年度)
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| 配分額 *注記 |
3,400千円 (直接経費: 3,400千円)
2006年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
2005年度: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
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| キーワード | 便検査 / APC / MCR / Stop codon / 酵母 / URA3 / 5FOA / stop codon |
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| 研究概要 |
本研究では大腸癌の80-90%にAPC(adenomatous polyposis coli)遺伝子の異常があることに着目し、便中に含まれる微量の脱落癌細胞からDNAを抽出し、酵母を用い大腸癌の存在診断を行うことを目的とした。
(1)ヒト大腸癌由来細胞株SW480はAPC遺伝子内のMCR(Mutation Cluster Region)内にストップコドンを生じる変異を持っている。健常人リンパ球由来DNAとSW480由来DNAを用いてAPC遺伝子のMCR部分のPCRを行い、URA3(+)vectorへ組み込み、酵母に遺伝子導入し通常培地とFOA(+)培地でcultureしコロニー形成を確認した。FOA(+)培地では健常人由来のものはコロニー形成せず、SW480由来のものではAPC遺伝子異常のストップコドンのためURA3発現がみられず、コロニー形成が見られた。
(2)次にヒト便よりDNAを抽出する方法について、既に確立されている手技より更に採取量・方法などの点で改善を加え、安定したDNA採取が可能となった。
(3)健常ボランティアからの便DNA抽出、APCMCRのPCR、酵母への遺伝子導入の技術は完了できた。しかしながら更に遺伝子導入における効率の改善が必要である。担癌患者に関しては、切除腫瘍に対するAPCのSequence手技は完成している。現在院内倫理委員会に申請し、遺伝子解析が可能となるよう計画を進めている。
(4)現段階では当該研究は成熟しているとはいえず、特許申請はまだ行っていない。今後の実験成果をもって行う予定である。
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