| 研究課題/領域番号 |
17591543
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
整形外科学
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
近藤 英司 北海道大学, 創成科学協同研究機構, 特任助教授 (60374724)
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| 研究分担者 |
安田 和則 北海道大学, 大学院医学研究科, 教授 (20166507)
遠山 晴一 北海道大学, 大学院医学研究科, 助教授 (60301884)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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| 研究課題ステータス |
完了 (2006年度)
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| 配分額 *注記 |
3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
2006年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
2005年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
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| キーワード | 腱 / マトリクス / リモデリング(再構築) / 移植 / 靭帯 / 滑膜細胞 / 細胞療法 / 前十字靱帯 / 腱移植 |
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| 研究概要 |
日本白色家兎の左膝関節上嚢内の滑膜組織から採取した滑膜由来幹細胞様細胞をコラゲナーゼ処理し4週間培養して1.5×10^6個以上の滑膜由来幹細胞様細胞を採取した。これらの第一継代細胞を用いて、細胞の3次元的培旋が可能なfibrinに包埋し、cell-fibrin sheetを作製した。ここでfibrin sheetにTGF-betal(10ng/ml)を投与し、右膝前十字靱帯をin situ凍結解凍処理した理想化自家腱移植モデルの靱帯周囲にそのsheetを縫着(自家細胞投与)した。12週で屠殺し、超微細構造学的解析を行った。右膝前十字靱帯実質部中央より採取した各切片を包埋したブロックを作製し、靱帯の長軸に対して垂直になるように各ブロックをマイクロトームに設置した。切り出した超薄横断切片を、酢酸ウラニル・クエン酸鉛染色を行って透過型電子顕微鏡を用いてコーラゲンフィブリルの横断面構造を観察した。倍率1万倍で撮影し、最終倍率4万倍で印画した。無作為に選択したコラーゲンフィブリルの画像データをdigitizerを用いてpersonal computerに入力した。コラーゲンフィブリルの長径と短径を画像解析ソフトを用いて計測し、短径をコーラゲンフィブリルの直径とした。TGF-betalを前投与し培旋自家滑膜幹細胞様細胞を投与した群では、それらを投与しない群に比べ、明らかにコーラゲンフィブリルの直径が大きく、正常群に近似していた。以上の結果は、腱移植モデルに対するEx vivoにおける液性因子処理培養自家滑膜由来細胞投与は、無治療群に比べて有意に再構築マトリックス(線維性結合組織)の力学的特性を増強させる可能性を示唆した。
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