| 研究概要 |
新生児・乳児の腸管運動障害を呈するヒルシュスプルング病(以下H病と略す)の病態発生においては、神経堤細胞由来の腸管神経細胞の分布の異常が認められている。本研究においては腸管グリアと神経細胞の間のシグナル伝達に注目して、H病の病態発生メカニズムの詳細な解析を目指した。即ち、H病モデルマウスを用いて、これらの病態発生の原因となった遺伝子変異、消化管神経叢におけるニューロン・腸管グリア細胞間シグナル(RET、GDNF,SOX10,NGF,NGFR,P2X7 receptor)の発現変異との相関を検討する目的で研究を行った。
自然突然変異系マウス:Lethal spotting(ls/ls)系、Piebald spotted(sl/sl)系およびDominant megacolon(Dom/Dom)系を免疫不全マウス維持管理環境下に準じたクリーン度に管理し維持した。消化管神経叢におけるニューロン・グリア細胞間シグナル伝達因子の発現動態解析として、各マウスより摘出した全消化管標本ならびに子宮より採取した胎仔を直ちに4% paraformaldehyde溶液(pH7.400)にて浸潤固定後、急速凍結し、その標本を10μm〜12μm厚の薄切、連続切片とした。腸管グリア細胞の特異的マーカーとしてGFAP及びS100α分子に対する抗体、ニューロン・グリア細胞間シグナル伝達因子のマーカーとしてRET,GDNF,SOX10,NGF,NGFR,SOX10,P2X7の各抗体を用いた。各標本において蛍光抗体法にて分子の局在性を特定し、H病の病態発生の原因となった遺伝子変異、消化管神経叢におけるニューロン・腸管グリア細胞間シグナルの発現変異との相関を検討した。さらに、これらの知見をH病の臨床例の神経発達について当てはめて検討した。その結果、臨床例においてSOX10の異常を有する症例がみられ、これらの例では腸管のグリア系のみならず末梢神経系さらには中枢神経系でのミエリン化の異常を示唆する所見が得られた。近い将来、H病のより詳細な病態解析が可能となり得ると考える。
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