| 研究課題/領域番号 |
17591954
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
機能系基礎歯科学
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| 研究機関 | 松本歯科大学 |
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研究代表者 |
王 宝禮 松本歯科大学, 歯学部, 教授 (20213613)
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| 研究分担者 |
今村 泰弘 松本歯科大学, 歯学部, 講師 (00339136)
荒 敏昭 松本歯科大学, 歯学部, 助手 (90387423)
宇田川 信之 松本歯科大学, 歯学部, 教授 (70245801)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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| 研究課題ステータス |
完了 (2006年度)
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| 配分額 *注記 |
3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
2006年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
2005年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
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| キーワード | ヒスタチン / 唾液タンパク質 / 自然免疫 / 細胞特異的発現 / 組織特異的発現 / プロモーター |
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| 研究概要 |
唾液蛋白質ヒスタチン(HTN)は抗菌作用を有し、口腔内自然免疫に関与する。現在までに我々は、RTNの口腔細菌由来プロテアーゼ活性阻害による自然免疫機構について報告した。HTNはHIV感染者で発現低下が認められ、日和見感染症や歯周疾患を伴う。また、ストレス、降圧剤などの服用、ある種の全身疾患により発症する口腔乾燥症は、唾液分泌低下に伴う各感染症誘発の可能性がある。これらは、唾液蛋白質の直接・間接的重要性を意味し、唾液蛋白質の詳細な機能解明が必要とされる。現在、HTNの唾液腺細胞特異的発現制御については全く明らかでないため、HTN遺伝子プロモーター領域(転写開始部位から上流約3kbp)をクローニングし、これをルシフェラーゼ遺伝子の上流に連結したプラスミドを構築した。これを唾液腺細胞RSG及びその他の組織由来細胞HeLa、HEK293、SCCTM、THP-1、COS-7、NIH3T3に導入後、転写活性をそれぞれ測定したところ、唾液腺以外の組織由来細胞全てにおいてプロモーター活性は殆ど無く、HSGで有意に認められた。また、プロモーター上流からデレーションミュータントを作製し、同様にルシフェアラーゼアッセイを行った。その結果、-2250〜-2082は転写促進領域であることが判明した。この領域に結合する因子の存在は、HSG及びHeLa核抽出液を用いたゲルシフト競合実験により確認された。最終的に、-2108〜-2082領域(HTN27box)プラス鎖DNA結合因子がHSGのみで認められ、その蛋白質の分子量は100kDaであることをUVクロスリンキング法により同定した。HTN27boxは、-2081〜+32領域と協調して転写を優位に促進することが示めされた。これらの結果から、HTNは細胞依存的な発現制御を担っており、遺伝子治療などに応用できることが考えられる。
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