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塩素イオン透過機能を持つ新規rCLCA分子の唾液腺における局在と生理機能の解明

研究課題

研究課題/領域番号 17591958
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 機能系基礎歯科学
研究機関福岡歯科大学

研究代表者

山崎 純  福岡歯科大学, 歯学部, 准教授 (50230397)

研究分担者 岡村 和彦  福岡歯科大学, 歯学部, 准教授 (00224056)
石橋 一成  福岡歯科大学, 歯学部, 講師 (50122768)
研究期間 (年度) 2005 – 2007
研究課題ステータス 完了 (2007年度)
配分額 *注記
3,650千円 (直接経費: 3,500千円、間接経費: 150千円)
2007年度: 650千円 (直接経費: 500千円、間接経費: 150千円)
2006年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
2005年度: 2,300千円 (直接経費: 2,300千円)
キーワード塩素イオンチャネル / 唾液腺 / 導管 / 上皮細胞 / エンドソーム / 輸送小胞 / 唾液 / 翻訳後修飾 / CLCA / Rab / Ca^<2+>活性化Cl^-チャネル / 細胞内小器官 / エンドソ-ム / Cl^-輸送 / 顎下腺 / 唾液分泌 / N型糖鎖 / 口腔乾燥症
研究概要

上皮細胞のCl^-チャネルはイオン輸送,ひいては水輸送の調節によって生体の恒常性の維持に寄与している。私たちは、マウスCLCA(mCLCA)の配列に相同性の高いPCR産物をもとにして、ラット回腸からCLCA mRNAをクローニングした(rCLCA)。哺乳細胞強制発現系(HEK293細胞)において、この分子がniflumic acid感受性のCa^<2+>活性化Cl^-透過機能を有することを見出した。発現細胞のTriton X-100可溶性膜画分から120kDaと86kDaのタンパクがイムノブロヅティングによって検出された。特異的抗体を用いた免疫細胞染色やビオチンによる膜表面標識法により、86kDaタンパクの細胞膜での局在が明らかになった。さらに、N-glycosidase Fの処置による分子量のシフトの結果、一次配列から予測される分子量(100kDaと75kDa)にN型糖鎖が付加されていることが明らかになった。rCLCAタンパクの組織発現を免疫染色法によって詳細に検討した結果、顎下腺と舌下腺においては導管系上皮の細胞表面および細胞内に発現がみられた。腺房部には陽性像は検出できなかった。rCLCA抗体に陽性の約120-130kDa並びに90kDaのN型糖タンパクはTriton X-100可溶性膜画分から検出されたが、細胞質画分からは検出されなかった。rCLCA siRNAを片側の舌下乳頭の唾液腺開口部に逆行性に注入したラットにおいて、ムスカリン受容体刺激により分泌される同側顎下腺由来の唾液Cl^-濃度が対照側に比して有意に増加した。以上の結果から、rCLCAは唾液腺導管上皮細胞に発現してCl^-再吸収に関与すると考えられた。次にTetR制御によるrCLCAの安定発現HEK293細胞株を利用してrCLCAの細胞内局在を詳細に検討した。rCLCAはRab5やRab11で標識される初期、あるいはリサイクリング・エンドソームにも存在することが示され、その局在はエンドサイトーシスさせたトランスフェリン受容体の局在と一致することが明らかになった。以上より、rCLCAが細胞内輸送小胞に局在し、膜へのリサイクリングを受けることが示唆された。これらの研究成果を基盤にして、唾液腺におけるCl^-チャネル関連タンパクのイオン輸送並びにその他の機能への関与について更に研究を進め、水輸送制御機構の解明に発展させることが必要であると思われる。

報告書

(4件)
  • 2007 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 2006 実績報告書
  • 2005 実績報告書
  • 研究成果

    (28件)

すべて 2008 2007 2006 2005

すべて 雑誌論文 (9件) (うち査読あり 4件) 学会発表 (17件) 図書 (2件)

  • [雑誌論文] Involvement of apical P2Y_2 receptor-regulated CFTR activity in muscarinic stimulation of Cl^- reabsorption in rat submandibular gland2008

    • 著者名/発表者名
      Ishibashi, K., Okamura, K., and Yamazaki, J.
    • 雑誌名

      Am.J.Physiol.:Regul.Integr.Comp.Physiol 294

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Involvement of apical P2Y_2 receptor-regulated CFTR activity in muscarinic stimulation of C1 reabsorption in rat submandibular gland2008

    • 著者名/発表者名
      Ishibashi, K., Okamura. K., and Yamazaki, J.
    • 雑誌名

      Am. J. Physiol. : Regul. Integr. Comp. Physiol. 294

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Involvement of apical P2Y_2 receptor-regulated CFTR activity in muscarinic stimulation of Cl rcabsortion in rat submandibular gland2008

    • 著者名/発表者名
      Ishibashi, K., Okamura, K., and Yamazaki, J.
    • 雑誌名

      Am.J.Physiol.:Regul.Integr.Comp.Physiol 294

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Roles of CLCA and CFTR in electrolyte re-absorption from rat saliva2006

    • 著者名/発表者名
      Ishibashi, K., Yamazaki, J., Okamura, K., Teng, Y., Kitamura, K. and Abe, K.
    • 雑誌名

      J.Dent.Res. 85

      ページ: 1101-1105

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Roles of CLCA and CFTR in electrolyte re-absorption from rat saliva2006

    • 著者名/発表者名
      Ishibashi. K.,Yamazaki, J., Okamura, K., Teng, Y., Kitamura, K., Abe, K.
    • 雑誌名

      J. Dent. Res. 85

      ページ: 1101-1105

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Roles of CLCA and CFTR in electrolyte re-absorption from rat saliva2006

    • 著者名/発表者名
      Ishibashi, K., Yamazaki, J., Okamura, K., Teng, Y., Kitamura, K., Abe, K.
    • 雑誌名

      J.Dent.Res. 85(12)

      ページ: 1101-1105

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] Characterization of CLCA protein expressed in ductal cells of rat salivary glands2005

    • 著者名/発表者名
      Yamazaki, J., Okamura, K., Ishibashi, K. and Kitamura K.
    • 雑誌名

      Biochim.Biophys.Acta.-Biomemb. 1715

      ページ: 132-144

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Characterization of CLCA protein expressed in ductal cells of rat salivary glands2005

    • 著者名/発表者名
      Yamazaki, J., Okamura, K., Ishibashi, K., Kitamura, K.
    • 雑誌名

      Biochim. Biophys. Acta. -Biomemb. 1715

      ページ: 132-144

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Characterization of CLCA protein expressed in ductal cells of rat salivary glands2005

    • 著者名/発表者名
      Yamazaki, J., Okamura, K., Ishibashi, K., Kitamura K.
    • 雑誌名

      Biochim.Biophys.Acta.-Biomemb. 1715

      ページ: 132-144

    • 関連する報告書
      2005 実績報告書
  • [学会発表] CLCAスプライシング変異型の細胞特異的な発現と細胞接着に対する抑制作用2008

    • 著者名/発表者名
      山崎 純, 岡村 和彦, 他
    • 学会等名
      第81回 日本薬理学会年会
    • 発表場所
      横浜
    • 年月日
      2008-03-19
    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [学会発表] CLCAスプライシング変異型の細胞特異的な発現と細胞接着に対する抑制作用2008

    • 著者名/発表者名
      山崎 純、岡村 和彦, 他
    • 学会等名
      第81回日本薬理学会年会
    • 発表場所
      横浜
    • 年月日
      2008-03-19
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [学会発表] ラット顎下腺における CLCAアイソフォームの選択的発現と機能2007

    • 著者名/発表者名
      山崎 純, 岡村 和彦
    • 学会等名
      第52回 日本唾液腺学会
    • 発表場所
      東京
    • 年月日
      2007-12-08
    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [学会発表] ラット顎下腺におけるCLCAアイソフォームの選択的発現と機能2007

    • 著者名/発表者名
      山崎 純、岡村 和彦
    • 学会等名
      第52回日本唾液腺学会
    • 発表場所
      東京
    • 年月日
      2007-12-08
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [学会発表] cAMP活性化Cl^-チャネルCFTRによるラット顎下腺唾液イオン濃度の制御2007

    • 著者名/発表者名
      石橋 一成, 山崎 純, 他
    • 学会等名
      第49回 歯科基礎医学会学術大会
    • 発表場所
      札幌
    • 年月日
      2007-08-30
    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [学会発表] cAMP活性化Cl-チャネルCFTRによるラット顎下腺唾液イオン濃度の制御2007

    • 著者名/発表者名
      石橋 一成、山崎 純, 他
    • 学会等名
      第49回歯科基礎医学会学術大会
    • 発表場所
      札幌
    • 年月日
      2007-08-30
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [学会発表] 唾液腺におけるCl^-チャネル関連分子CLCAの局在と機能2007

    • 著者名/発表者名
      山崎 純
    • 学会等名
      第49回 歯科基礎医学会学術大会サテライトシンポジウム
    • 発表場所
      札幌
    • 年月日
      2007-08-29
    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [学会発表] 唾液腺におけるCl-チャネル関連分子CLCAの局在と機能2007

    • 著者名/発表者名
      山崎 純
    • 学会等名
      第49回歯科基礎医学会学術大会サテライトシンポジウム
    • 発表場所
      札幌
    • 年月日
      2007-08-29
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [学会発表] 翻訳後修飾を受けたCa^<2+>活性化Cl^-チャネル関連分子の細胞内局在の差異2007

    • 著者名/発表者名
      山崎 純, 岡村 和彦, 北村 憲司
    • 学会等名
      第80回 日本薬理学会年会
    • 発表場所
      名古屋
    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [学会発表] Localization and Function of CLCA in rat submandibular glands2006

    • 著者名/発表者名
      Jun Yamazaki.
    • 学会等名
      3rd International Symposium on Salivary Glands in Honor of Niels Stensen
    • 発表場所
      Okazaki,Japan
    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [学会発表] ラット顎下腺に局在するCa^<2+>活性化Cl^-チャネル関連分子CLCAの性質2006

    • 著者名/発表者名
      山崎 純, 岡村 和彦, 他
    • 学会等名
      第48回 歯科基礎医学会学術大会
    • 発表場所
      鶴見
    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [学会発表] ラットCa^<2+>活性化C1^-チャネル関連分子rCLCAの局在2006

    • 著者名/発表者名
      岡村 和彦, 山崎 純, 他
    • 学会等名
      第48回 歯科基礎医学会学術大会
    • 発表場所
      鶴見
    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [学会発表] ラット顎下腺導管上皮細胞における再吸収においてClイオンチャネルの果たす役割2006

    • 著者名/発表者名
      石橋 一成, 山崎 純, 他
    • 学会等名
      第48回 歯科基礎医学会学術大会
    • 発表場所
      鶴見
    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [学会発表] ラット顎下腺導管におけるCl^-チャネル関連分子CLCAアイソフォームの局在と機能2006

    • 著者名/発表者名
      山崎 純, 岡村 和彦, 他
    • 学会等名
      第83回 日本生理学会大会
    • 発表場所
      群馬
    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [学会発表] 短縮型CLCAの分子クローニングとラット顎下腺における発現2006

    • 著者名/発表者名
      山崎 純, 北村 憲司
    • 学会等名
      第79回 日本薬理学会年会
    • 発表場所
      横浜
    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [学会発表] Cloning and Characterization of CLCA Protein Expressed in Ductal Cells of Rat Salivary Glands2006

    • 著者名/発表者名
      Jun Yamazaki, Kazuhiko Okamura, Kazunari Ishibashi, et. al.
    • 学会等名
      50th Meeting of Biophysical Society
    • 発表場所
      Salt Lake City,Utah,USA
    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [学会発表] Ca^<2+>活性化Cl^-チャネル関連分子CLCAのラット唾液腺における局在と機能2005

    • 著者名/発表者名
      山崎 純, 石橋 一成, 他
    • 学会等名
      第50回 日本唾液腺学会
    • 発表場所
      東京
    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [図書] イオンチャネル創薬-現状とその可能性 7.Cl^-チャネル創薬の現状と展望, 医学のあゆみ223(6)2007

    • 著者名/発表者名
      山崎 純
    • 出版者
      医歯薬出版
    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [図書] イオンチャネル創薬-現状とその可能性7.Clチャネル創薬の現状と展望、医学のあゆみ223(6)2007

    • 著者名/発表者名
      山崎 純
    • 出版者
      医歯薬出版
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書

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公開日: 2005-04-01   更新日: 2016-04-21  

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