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サーモセンシングタンパク質の立体構造解析と医療への応用

研究課題

研究課題/領域番号 17659012
研究種目

萌芽研究

配分区分補助金
研究分野 物理系薬学
研究機関広島大学

研究代表者

杉山 政則  広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (30106801)

研究分担者 熊谷 孝則  広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教授 (70274058)
的場 康幸  広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教授 (90363051)
研究期間 (年度) 2005 – 2006
研究課題ステータス 完了 (2006年度)
配分額 *注記
3,100千円 (直接経費: 3,100千円)
2006年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
2005年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
キーワードサーモセンシング / リプレッサー / 結晶化 / X線結晶構造解析 / タンパク質・核酸複合体 / Streptomyces albus / 核酸・タンパク質複合体
研究概要

放線菌Streptomyces albusが産生するRheAはリプレッサータンパク質であり,熱を感知してその構造を可逆的に変化させるサーモセンシング機能を有する。本研究では,RheAのサーモセンシング機能を構造生物学的に明らかにするとともに,その機能を医療に役立つ分子スイッチの開発へ応用することを目的としている。
昨年度,C末端ヒスチジンタグ付きRheAとその特異的なオペレーターDNAとの複合体の結晶化に成功し,複合体結晶のX線回折実験を行ったが,構造解析に十分な回折強度データは得られなかった。そこで,天然型RheAの大腸菌における発現を行い,各種クロマトグラフィーの手法を用いることにより,その精製系を確立することができた。本年度は,天然型RheAを大量に取得後,その結晶化を行った。シッティングドロップ蒸気拡散法により結晶化を行ったが,数百種を超える結晶化条件を検討したにもかかわらず,結晶は生成しなかった。天然型RheAとオペレーターDNAとの複合体の結晶化も試みたが,結晶は生成しなかった。天然型RheAの精製は困難であり,かつ,結晶も生成しない。そこで,精製の容易なヒスチジンタグ付きRheAへ回帰することにした。ただし,C末端ヒスチジンタグ付きRheAとオペレーターDNAとの複合体の結晶化に成功しているが,その結晶は良質のX線回折データを与えない。RheAのC末端領域はDNA結合部位と考えられることから,C末端ヒスチジンタグが良質結晶の生成を妨げている可能性がある。したがって,N末端ヒスチジンタグ付きRheAを用いることにした。現在,N末端ヒスチジンタグ付きRheAの発現系を構築している。

報告書

(2件)
  • 2006 実績報告書
  • 2005 実績報告書
  • 研究成果

    (5件)

すべて 2006

すべて 雑誌論文 (5件)

  • [雑誌論文] The mitomycin C (MMC)-binding protein from MMC-producing microorganisms protects from the lethal effect of bleomycin : crystallographic analysis to elucidate the binding mode of the antibiotic to the protein2006

    • 著者名/発表者名
      Danshiitsoodol, N.
    • 雑誌名

      Journal of Molecular Biology 360

      ページ: 398-408

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] Identification and kinetic study of tyrosinase inhibitors found in sake lees2006

    • 著者名/発表者名
      Joen, H. J.
    • 雑誌名

      Journal of Agricultural and Food Chemistry 54

      ページ: 9827-9833

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] Purification and characterization of the second Streptomyces phospholipase A_2 refolded from an inclusion body2006

    • 著者名/発表者名
      Jovel, S. R.
    • 雑誌名

      Protein Expression & Purification 50

      ページ: 82-88

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] Crystallographic evidence that the dinuclear copper center of tyrosinase is flexible during catalysis2006

    • 著者名/発表者名
      Yasuyuki Matoba
    • 雑誌名

      The Journal of Biological Chemistry 281・13

      ページ: 8981-8990

    • 関連する報告書
      2005 実績報告書
  • [雑誌論文] Molecular cloning and characterization of gene encoding novel puromycin-inactivating enzyme from blasticidin S-producing Streptomyces morookaensis2006

    • 著者名/発表者名
      Motohiro Nishimura
    • 雑誌名

      Journal of Bioscience and Bioengineering 101

      ページ: 63-69

    • 関連する報告書
      2005 実績報告書

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公開日: 2005-04-01   更新日: 2016-04-21  

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