血液脳関門を介したミクログリアの脳内移行に関与する分子の同定

• 研究課題/領域番号: 17659026
• 研究種目: 萌芽研究
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 生物系薬学
• 研究機関: 岩手医科大学 (2007); 国立長寿医療センター(研究所) (2005-2006)
• 研究代表者: 駒野 宏人 岩手医科大学, 薬学部, 教授 (40170378)
• 研究期間 (年度): 2005 – 2007
• 研究課題ステータス: 完了 (2007年度)
• 配分額: 3,300千円 (直接経費: 3,300千円); 2007年度: 700千円 (直接経費: 700千円); 2006年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円); 2005年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
• キーワード: ミクログリア / 血液脳関門

研究概要

本研究は、ミクログリアの持つ血液脳関門(BBB:blood-brain barder)通過機能に関与する分子を同定し、その実態を明らかにすることである。
作年度は、マウス由来株化ミクログリアRa2[澤田(名古屋大学)により樹立]よりレトロウイルスベクターとするcDNAライブラリーを作成した。
本年度は、トランスマイグレイションアッセイ(平成17年度確立)を用いて、作成したcDNAライブラリーより、ミクログリアの血液脳関門通過機能に関与する分子のスクリーニングを実施した。まず、BBBを構成している内皮細胞株(MBEC4細胞:Drug Metab.Phamacokin.19:270、2004)をトランスウェルの上部チャンバーのメンベレン上、(孔サイズ:3μM)に3日間培養し、上部と下部チャンバーとの抵抗値がほぼ200Ωになることを確認した。その後、cDNAで感染させたRa2(全細胞数5X10^6細胞、1ウェルあたり4x10^4細胞)を上部チャンバーに培養した。さらに培養3日後、下部チャンバーに移行したRa2を数えた。その結果、下部チャンバーに移行したRa2細胞数は、cDNAライブラリー感染依存に高いウェルも存在したが、現在、正確に、それに関与する分子の同定にまでは至らなかった。これは、スクリーニングの培養時間が長く、その間、MBEC4細胞が部分的に破損し、ベクター感染Ra2細胞(background)においても、下部チャンバーに移行する細胞数が多数認められたため、関与する分子の同定を困難にしていると考えられた。現在、培養時間を短縮するためのスクリーニング条件をより詳細に検討を進めている。

研究成果

• [雑誌論文] Novel role of presenilins in maturation and transport of integrin β1 (2008)
  • 著者名/発表者名: Zou K., Hosono T., Nakamura T., Shiraishi H., Maeda T., Komano H., Yanagisawa K., Michikawa M
  • 雑誌名: Biochemistry (印刷中)
  • 査読あり
• [雑誌論文] A family of membrane proteins associated with presenilin expression and γ-secretase function (2008)
  • 著者名/発表者名: Araki W., Takahashi-Sasaki N., Chui DH., Saito S., Takeda K., Shirotani K., Takahashi K., Murayama KS., Kametani F., Shiraishi H., Komano H., Tabira T.
  • 雑誌名: FASEB J. 22 ページ: 819-827
  • 査読あり
• [雑誌論文] Reconstitution of γ-secretase by truncated presenilin (PS) fragments revealed that PS C-terminal transmembrane domain is critical for formation of γ-secretase complex (2006)
  • 著者名/発表者名: Shiraishi H., et al.
  • 雑誌名: Genes to Cells 11 ページ: 83-93
• [雑誌論文] Homocysteine-induced endoplasmic reticulum protein (Herp) is up-regulated in sporadic inclusion-body myositis and in endoplasmic reticulumn stress-induced cultured human muscle fibers (2006)
  • 著者名/発表者名: Nogalska A., et al.
  • 雑誌名: J. Neurochem. 96 ページ: 1491-1499
• [雑誌論文] Characterization of APH-1 mutants with a disrupted transmembrane GxxxG motif (2006)
  • 著者名/発表者名: Araki W., et al.
  • 雑誌名: J. Mol. Neurosci 29 ページ: 35-44
• [雑誌論文] Reconstitution of γ -secretase by truncated presenilin (PS) fragments revealed that PS C-terminal transmembrane domain is critical for formation of γ -secretase complex (2006)
  • 著者名/発表者名: Shiraishi H., et al.
  • 雑誌名: Genes to Cells 11 ページ: 83-93
• [雑誌論文] Homocysteine-induced endoplasmic reticulum protein (Herp) is up-regulated in sporadic inclusion-body myositis and in endoplasmic reticulumn stress-induced cultured human muscle fibers (2006)
  • 著者名/発表者名: Nogalska A., et al.
  • 雑誌名: J.Neurochem. 96 ページ: 1491-1499
• [雑誌論文] Characterization of APH-1 mutants with a disrupted transmembrane GxxxG motif (2006)
  • 著者名/発表者名: Araki W., et al.
  • 雑誌名: J.Mol.Neurosci. 印刷中
• [雑誌論文] Random mutagenesisi of Presenilin 1 identifies novel mutants exclusively generating longer Amyloid β peptides (2005)
  • 著者名/発表者名: Nakaya Y., et al.
  • 雑誌名: J.Biol.Chem. 280 ページ: 19070-19077
• [学会発表] Angiotensin-Converting Enzyme Converts A β 1-42 to A β 1-40, and Its Inhibition enhances Brain A β deposition. (2007)
  • 著者名/発表者名: 鄒 鶤、山口 晴保、赤津 裕康、阪本 崇彰、高美 姫、溝口 和臣、キョウ 建生、于 文新、山本 孝之、小阪 憲司、駒野 宏人、柳沢 勝彦、道川 誠
  • 学会等名: 第30回日本分子生物学会年会、第80回日本生化学会大会合同大会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2007-12-14
• [学会発表] Herpによるプレセニリン(PS)複合体形成制御機構について (2007)
  • 著者名/発表者名: 丸谷 寿裕、前田 智司、小亀 浩一、鄒 鶤、道川 誠、駒野 宏人
  • 学会等名: 第30回日本分子生物学会年会、第80回日本生化学会大会合同大会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2007-12-14