| 研究課題/領域番号 |
17659095
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| 研究種目 |
萌芽研究
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
病態医化学
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| 研究機関 | 熊本大学 |
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研究代表者 |
中尾 光善 熊本大学, 発生医学研究センター, 教授 (00217663)
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| 研究期間 (年度) |
2005
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| 研究課題ステータス |
完了 (2005年度)
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| 配分額 *注記 |
3,400千円 (直接経費: 3,400千円)
2005年度: 3,400千円 (直接経費: 3,400千円)
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| キーワード | ゲノム / 遺伝子 / 発現制御 / 発生・分化 / 癌 / クロマチン |
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| 研究概要 |
[1]CTCF複合体の構成因子の同定
CTCFの各種ドメインを用いた酵母2ハイブリッド法で、cDNAライブラリーをスクリーニングした。CTCF結合性のクロマチンリモデリング因子が同定されて、得られたクローンのシークエンス、全長cDNAのクローニングを施行した。
[2]CTCFとその結合分子の相互作用の解析
同定した結合分子の発現ベクターおよび特異的な抗体を作製した。大腸菌で作製したリコンビナントタンパク質を用いたin vitroの結合実験で、直接的な結合性を示した。
[3]CTCFとその結合分子の過剰発現およびRNAiによるノックダウン
CTCFおよび結合分子の発現ベクターおよび特異的にノックダウンできるsiRNA(またはshRNA発現ベクター)をヒト培養細胞に適用した。
[4]CTCF複合体の機能、遣伝子発現・クロマチンとの関連性の解析
CTCFおよび結合分子の発現系およびノックダウン系を用いて、内因性の遺伝子群の発現解析およびクロマチン解析を行った。H19遺伝子プロモーターとエンハンサー、CTCF結合配列を組み込んだルシフェラーゼ発現ベクターを作製した。
[5]細胞・組織におけるCTCFとその結合分子の発現解析
各種の培養細胞株において、CTCFおよびその結合因子の発現状況をノーザンブロット、ウエスタンブロット、免疫細胞染色で解析した。両者が共発現、共局在することが明らかになった。
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