| 研究課題/領域番号 |
17659100
|
|---|
| 研究種目 |
萌芽研究
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 研究分野 |
人体病理学
|
|---|
| 研究機関 | 信州大学 |
|---|
研究代表者 |
佐野 健司 信州大学, 医学部附属病院, 講師 (50205994)
|
|---|
| 研究分担者 |
太田 浩良 信州大学, 医学部, 教授 (50273107)
上原 剛 信州大学, 医学部附属病院, 助教(特定雇用) (80402121)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2005 – 2007
|
| 研究課題ステータス |
完了 (2007年度)
|
| 配分額 *注記 |
3,300千円 (直接経費: 3,300千円)
2007年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
2006年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
2005年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
|
|---|
| キーワード | H.pylori / Cag A / Vac A / Shuttle vector / shuttle vector |
|---|
| 研究概要 |
H.pyloriの標準株ATCC43504からDNAを抽出し、Cag A, Vac Aの全長の遺伝子をPCRで増幅してクローニングし、シークエンスで確認した。よく知られているように、H.pyloriに株ごとにCag A, Vac Aの塩基変異が多く存在し、これが病原性と深い関係がある。特に、Cag Aのチロシンリン酸化部位のリピートの数は重要で、標準株ATCC43504の場合は5回と最も多い方に属しており、病原性の強い性質を備えているものと推測される。Cag Aのチロシンを含む繰り返し配列部位は上皮細胞に注入された後に、細胞内のリン酸化蛋白でチロシン残基がリン酸化され、これによって細胞内にシグナル伝達が開始され、サイトカインなどの起炎分子の誘導が起こるとされている。
Cag A遺伝子をFLAGを含む発現ベクターとGFPを含む発現ベクターに組み込んで、まずHEK293T, AGSなどの培養細胞内での発現を観察した。次に、TagつきのCag A遺伝子をshuttle vectorであるH.pylori発現ベクター(pHel3)に組み込んで大腸菌でまず発現させ、抗生物質で選択した後に、H.pyloriに遺伝子導入した。Tagがあるかないかで、内因性Cag Aと強制発現したCag Aを区別した。そして、Cag Aを導入したH.pyloriは抗生剤によって選択した。このTagつきCag A導入H.pyloriをAGSに感染させたところ、遺伝子操作のないH.pyloriと同様なハミングバードと言われる変化を示した。
|
