| 研究課題/領域番号 |
17659279
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| 研究種目 |
萌芽研究
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
代謝学
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| 研究機関 | 順天堂大学 |
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研究代表者 |
河盛 隆造 順天堂大学, 医学部, 教授 (00116021)
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| 研究分担者 |
綿田 裕孝 順天堂大学, 医学部, 助教授 (60343480)
柳田 光昭 順天堂大学, 大学院医学研究科, 講師 (80365569)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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| 研究課題ステータス |
完了 (2006年度)
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| 配分額 *注記 |
3,300千円 (直接経費: 3,300千円)
2006年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
2005年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
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| キーワード | 膵β細胞 / インスリン / アセチル化蛋白 / 分化 / 発生 |
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| 研究概要 |
膵β細胞分化過程には他の細胞と同様、多数の特異的な転写因子群が時間、空間特異的に発現し、厳格に分化を制御することが知られている。この膵β細胞の分化過程を検討するうえでの貴重なモデルがAR42J-B13細胞である。この細胞はactivin A、HGF応答性にインスリン陽性細胞に分化する。しかも、その分化過程における転写因子hierarchyはマウス発生過程におけるそれとかなり近似していることが、私共の研究も含めて明らかになってきている。転写因子の活性化は、DNAのアセチル化が関与するが、それとともに、その転写因子複合体を形成する蛋白もアセチル化することが、知られている。そこで、今回、この分化過程に関与してアセチル化される蛋白の同定を試みた。
このAR42J細胞分化前後で核蛋白を抽出し、抗アセチル化リジン抗体を加えた後、プロテインAセファロースにてアセチル化されている蛋白を抽出した。その後、抽出された蛋白を2次元電気泳動法により分離した。
抗アセチル化リジン抗体を用いたWestern blottingの結果、AR42J細胞分化前後で変化の認められる発色スポットを、二次元電気泳動スポットマッチングソフトウエア(PDquest等)を用いて確認した。その結果、銀染色で染色され、かつWestern blottingでも検出される蛋白の存在が認められた。この蛋白をトリプシン梢化後、MS/MSにて解析を進め、蛋白の同定を試みているが、蛋白量微量のため、蛋白配列の同定に困難を来たしているのが現状である。
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