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神経幹細胞におけるサイトメガロウイルス感染感受性とサイクロフィリンの役割

研究課題

研究課題/領域番号 17790259
研究種目

若手研究(B)

配分区分補助金
研究分野 実験病理学
研究機関浜松医科大学

研究代表者

河崎 秀陽  浜松医科大学, 医学部, 助手 (90397381)

研究期間 (年度) 2005 – 2006
研究課題ステータス 完了 (2006年度)
配分額 *注記
3,200千円 (直接経費: 3,200千円)
2006年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
2005年度: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
キーワードサイトメガロウイルス / 神経幹細胞 / サイクロフィリン / 潜伏感染 / 神経幹細胞移植
研究概要

1.サイクロフィリンAとHDAC蛋白たの関連検索
サイクロフィリンA(CyPA)とサイクロフィリンB(CyPB)に特異的なsiRNAを用いて内因性CyPA, CyPBの発現を低下させたところ、神経幹細胞においてCyPA発現低下のみがMCMV感染抑制を引き起こした。CyPAとの結合蛋白を調べるために、神経幹細胞のlysateを準備した。CyPA-GST融合蛋白を作成し、神経幹細胞のlysateを用いてGST-pull downをおこなった。分離精製後、蛋白質複合体をSDS-PAGEで分離し、western blotting法にてHDAC2抗体で染色した。Western blottingの結果、CyPA蛋白とHDAC2蛋白が結合することが確認できた。現在、CyPA蛋白と結合するウイルス蛋白や他のホストの蛋白を確認するため、感染細胞1ysate特異的に検出された未知のバンドを回収し、プロテアーゼ消化、プロテアーゼ切断してできたペプチドをプロテインシークエンスサーにて配列の解析を試みている。
2.データの総括と論文作成::データを総括し、論文を作成した。
3.論文投稿:論文を投稿し、現在revise中である。
4.MCMV脳潜伏感染マウスの作成
C57BL/6マウスまたはBALB/cマウス新生児脳内にlacZを発現する変異ウイルス(RM453)を感染させ、脳内にCMV潜伏感染したマウスを作成する。感染後4-6ヶ月後に神経細胞移植実験のrecipientとして用いた。
5.BALB/cマウスとC57BL/6マウスとラットより神経幹細胞を採取・培養
同種問、異種間神経幹細胞移植を成立させるため、BALB/c, C57BL/6マウス、ラットの新生児またはadultより神経幹細胞を採取培養する。EGF, FGF存在下で継代培養を行い、neuron, glia,01igodendrocyteへの3系統の細胞への分化を確認する。同種または異種間神経幹細胞移植後の脳に潜伏感染したMCMVが再活性化してくるか否かを現在検討中である。

報告書

(2件)
  • 2006 実績報告書
  • 2005 実績報告書
  • 研究成果

    (6件)

すべて 2006 2005

すべて 雑誌論文 (4件) 図書 (1件) 産業財産権 (1件)

  • [雑誌論文] Mouse embryonic stem cells are not susceptible to cytomegalovirus but acquire susceptibility during differentiation2006

    • 著者名/発表者名
      Matsukage S, Kosugi I, Kawasaski H, Miura K, Kitani H, Tsutsui Y
    • 雑誌名

      Birth Defects Res A Clin Mol Teratol 76巻2号

      ページ: 115-125

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書 2005 実績報告書
  • [雑誌論文] Differential expression of the immediate-early 2 and 3 proteins in developing mouse brains infected with murine cytomegalovirus.2006

    • 著者名/発表者名
      Ishiwata M, Baba S, Kawashima M, Kosugi I, Kawasaki H, Kaneta M, Tsuchida T, Kozuma S, Tsutsui Y
    • 雑誌名

      Arch Virol. 151巻11号

      ページ: 2181-2196

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] Cytomegalovirus infection inhibits the expression of N-methyl-D : -aspartate receptors in the developing mouse hippocampus and primary neuronal cultures2006

    • 著者名/発表者名
      Kosugi I, Kawasaki H, Tsuchida T, Tsutsui Y
    • 雑誌名

      Acta Neuropathol(Berl) 109巻3号

      ページ: 475-482

    • 関連する報告書
      2005 実績報告書
  • [雑誌論文] Neuropathogenesis in cytomegalovirus infection : indication of the mechanisms using mouse models.2005

    • 著者名/発表者名
      Tsutsui Y, Kosugi I, Kawasaki H
    • 雑誌名

      Rev Med Virol 15巻5号

      ページ: 327-345

    • 関連する報告書
      2005 実績報告書
  • [図書] 免役の進化-シクロスポリン20年の軌跡(シクロスポリン学術国際シンポジウム編)神経幹細胞におけるシクロスポリンのサイトメガロウイルス感染抑制効果2006

    • 著者名/発表者名
      河崎秀陽 et al.
    • 出版者
      医薬ジャーナル社
    • 関連する報告書
      2005 実績報告書
  • [産業財産権] USE OF CYCLOSPORINS IN TREATMENT OF CYTOMEGALOVIRUS INFECTIONS2005

    • 発明者名
      Kawasaki H, Tsutsui Y
    • 権利者名
      国学法人浜松医科大学, Novartis AG
    • 産業財産権番号
      2005-308740
    • 出願年月日
      2005-10-24
    • 関連する報告書
      2006 実績報告書 2005 実績報告書

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公開日: 2005-04-01   更新日: 2016-04-21  

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