| 研究課題/領域番号 |
17790260
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| 研究種目 |
若手研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
実験病理学
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| 研究機関 | 浜松医科大学 |
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研究代表者 |
森 弘樹 浜松医科大学, 医学部, 助手 (40397435)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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| 研究課題ステータス |
完了 (2006年度)
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| 配分額 *注記 |
3,400千円 (直接経費: 3,400千円)
2006年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
2005年度: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
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| キーワード | Eph / Ephrin / 大腸癌 / DNA methylation |
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| 研究概要 |
Eph familyの中で、大腸癌症例において、腫瘍部での発現が低下していることが示されているEphA7の解析を行っている。
細胞生物学的な解析にあたり、pQCXIN vector (retro virus vector)を用いた発現vectorを制作した。制作されたものはEphA7のC端にEGFPのついたEphA7-EGFP、 Ephrin binding domainのないEphA7(-Elbd)-EGFP、 Extracellular domainのないEphA7(-etracellular)-EGFP、 kinase domain以下のないEphA7(-KD)-EGFP、 SAm domain以下のないEphA7(-SAM)-EGFPとcontrolのEGFPである。
上述のものを、大腸癌細胞株HCT116を用いて解析を行った。HCT116はEphA7がhypermethylationによって発現低下していることが示されている。さらに今回、EphrinA1-5がmRNAレベルで発現していることが確認された。
各constructがHCT116でどのように局在するか観察した。その結果、全長、-KD、-SAMで細胞膜に局在した。これは一般的にいわれていることと矛盾しない。しかし、-Elbdや-extracellularで細胞内にびまん性に局在した。これはEphA7のN端側に膜移行signalがあるといわれていることに矛盾しない。
細胞挙動については、細胞増殖やsoft agarにおいてEphA7とcontrol間で差が認められ、EphA7がある方が細胞増殖は抑制され、colony形成も抑制された。
今後それぞれのdomainを削ったものにおける細胞挙動の差を観察し、expression arrayや免疫共沈法等でEphA7発現低下における癌進展のsignal経路を同定する。
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