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腎臓特異的薬物輸送蛋白OATP-Rのノックアウトマウスの作製と生体内機能の解明

研究課題

研究課題/領域番号 17790347
研究種目

若手研究(B)

配分区分補助金
研究分野 応用薬理学
研究機関東北大学

研究代表者

鈴木 健弘  東北大学, 大学院・医学系研究科, COEフェロー (50396438)

研究期間 (年度) 2005 – 2006
研究課題ステータス 完了 (2006年度)
配分額 *注記
3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
2006年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
2005年度: 2,300千円 (直接経費: 2,300千円)
キーワードトランスレーショナルリサーチ / 遺伝子 / 薬理学
研究概要

研究の目的
研究代表者が単離したOATP-Rは腎尿細管上皮細胞の血管側に発現する有機アニオントランスポーターであり、腎臓での薬剤や腎不全物質の排泄を担う分子である。本研究では、OATP-RノックアウトマウスをCre recombinnaseを用いたconditional gene targetingで作製し、機能喪失モデルでOATP-Rの生体内機能の解析を行い、さらに腎不全モデル、薬剤性腎障害モデルをノックアウトマウスで作製し、その病態における変化を検討することを目的とする。
ノックアウトコンストラクトの作製
マウスOATP-Rはマウス第一染色体上に13個のexonが約50kbに渡って分布している。この第4番目のexon(以下Ex4)をノックアウトするためのGene Targeting vectorの作製を行った。Gene Targeting vectorの構造はEx4を挟み、その5'側のintronにloxP配列を、3'側のintronにES細胞への導入時のpositive selectionのためのneomycin耐性遺伝子の両端にloxP配列を配置してある、loxP-neo-loxpカセットを挿入し、Cre recombihaseによるEx4のdeletionを行うようにし、また相同組換えのために5'側に約8.8kbのlonga arm、3'側に1.2kbのshort armとなるマウスOatp-Rのgenomic DNAを配置する設計とした。
実際にノックアウトマウスを作製する系統である、129SVJ mice strainのgenomic libraryをEx4を含むDNAプローブを用いた方法でスクリーニングしEx4の5'側、3'側とも約10kbを含むgenomic DNAのクローンを単離し、さらに適切な制限酵素で切り出した断片をpBluescript-SK(+) plasmidへサブクローニングした。loxP配列の挿入上問題となる、intron上のcis elementを避けるため、同部位のintronの塩基配列をsequenceで確認の上(NIH等のマウスゲノムDNAのデータベースにあるC57BL/6 strainと比較すると、129SVJ strainではintron部分の塩基配列はsequenceを行った約3000bpの部位のみでも全体の1.4%程で塩基の置換や欠失等の相違があった)、loxP配列挿入部位を決定した。
現役Gene Targetinng vectorが完成し、今後ES細胞への導入とノックアウトマウス系列の樹立の段階へと研究を進めていく予定である。

報告書

(2件)
  • 2006 実績報告書
  • 2005 実績報告書
  • 研究成果

    (3件)

すべて 2006 2005

すべて 雑誌論文 (3件)

  • [雑誌論文] Isolation and characterization of a digoxin transporter and its rat homologue expressed in the kidney2006

    • 著者名/発表者名
      鈴木健弘
    • 雑誌名

      分子心血管病 7巻・4号

      ページ: 414-416

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] 腎障害合併高血圧における降圧剤の使い方2005

    • 著者名/発表者名
      鈴木健弘
    • 雑誌名

      クリニカ 32巻・3号

      ページ: 167-171

    • 関連する報告書
      2005 実績報告書
  • [雑誌論文] ヒト腎臓特異的に発現しジゴキシン輸送を担う新規アニオントランスポーターの単離と機能解析及びラット相同遺伝子の同定2005

    • 著者名/発表者名
      鈴木健弘
    • 雑誌名

      東北医学雑誌 117巻・2号

      ページ: 105-108

    • 関連する報告書
      2005 実績報告書

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公開日: 2005-04-01   更新日: 2016-04-21  

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