| 研究概要 |
(1)B細胞特異的AML1欠損マウスの確立
私達が既に確立したCre-LoxPシステムを用いたAML1コンディショナルノックアウトマウスの系を使用し、B細胞特異的AML1欠損マウスを確立に成功した。具体的にはAML1flox/+マウスとCD19-Creノックインマウスを交配し、AML1flox/- CD19-Creマウスを作製した。
(2)AML1欠損B細胞分化段階の同定
作製したマウスを更にSTOPflox-GFPトランスジェニックマウスを交配し、AML1flox/- STOPflox-GFP CD-19-Creマウスを作製した。このマウスでGFP陽性となる細胞集団が、AML1欠損する細胞集団とほぼ一致する。B細胞初期分化(プレB細胞)からB細胞終末分化にてAML1が欠損していることを確認した。
(3)B細胞特異的AML1欠損マウスの解析
作製したマウスを用いて、解析を進めた。病理組織学的解析では骨髄、脾臓、リンパ節とも明確な表現系を確認できなかった。フローサイトメーターによるB細胞系各分化段階の解析では、B細胞初期分化、とりわけプレB細胞から初期B細胞への分化が障害され、B細胞初期分化にAML1が重要な転写因子であることを確認した。また後期B細胞分化に関して、B細胞終末分化としての形質細胞分化が、特に抗原負荷状態で障害されることを確認した。血清抗原各サブクラス量のELISA法による測定では、SPF環境下では特に異常を認めず、現在抗原負荷状態での血清抗原各サブクラス量を測定したところ、B細胞特異的AML1欠損マウスではIgG1,IgG2a, IgG2bの産生が有意に増加傾向を示した。さらに、B細胞終末分化に抗原刺激下で観察されるSHM(体細胞超変異)に着目したところ、B細胞特異的AML1欠損マウス由来B細胞はSMHの頻度がコントロールに比し、有意に増加していた。これらのことはAML1がB細胞終末分化においてリプレッサーとして働くことを示唆している。今後の研究では、これら転写調節をする上での、AML1の標識遺伝子の検索が重要となろう。
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