| 研究課題/領域番号 |
17790790
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| 研究種目 |
若手研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
皮膚科学
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| 研究機関 | 愛知医科大学 |
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研究代表者 |
渡邉 大輔 愛知医科大学, 医学部, 助教授 (40324404)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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| 研究課題ステータス |
完了 (2006年度)
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| 配分額 *注記 |
2,300千円 (直接経費: 2,300千円)
2006年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
2005年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
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| キーワード | ヘルペスウイルス / HHV-8 / LAMP法 / 迅速診断法 / カポジ肉腫 |
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| 研究概要 |
目的、意義:LAMP(loop-mediated isothermal amplifyication)法は従来のPCR法に比べより迅速かつ簡便な核酸増幅法として注目されている。今回我々はカポジ肉腫関連ヘルペスウイルス(KSHV)の迅速な検出を目指し、LAMP法を用いたウイルスDNA検出法の確立を試みた。
材料と方法:プライマーはKSHV minor capsid protein geneを基に作成した。特異性の確認のため、KSHV感染細胞(BCP-1)より抽出したDNAに加え、単純ヘルペスウイルス1型、2型、水痘帯状疱疹ウイルス、EBウイルス、サイトメガロウイルス、さらにHHV-6A、6B、HHV-7の各DNAを用いた。感度決定のため標的領域をPCR法で増幅、得られたPCR産物をpGEM-T vectorを用いてサブクローニング。その後、精製したプラスミドDNAの希釈系列を用いて感度を測定した。
結果:KSHV DNAのみが増幅され、他のヘルペスウイルスDNAは増幅されず、今回作成したプライマーはKSHVに特異的であることが確認された。感度は30分のLAMP反応で100コピーの検出が可能であった。臨床検体を用いた検討では、Kaposi肉腫患者検体17例(凍結切片10例、パラフィン切片7例)中、14例からKSHV DNAを検出可能でありreal-time PCRを用いた結果と一致した。
考察:今回のLAMP法による定量法を確立したことで従来の方法より、より迅速かつ簡便にKSHV又はHHV-8の定量を行うことが可能となった。臨床検体を用いた検討でも、今回の方法の簡便性、有用性を示すことができた。今後更に検討を重ね、実際の臨床でも応用できるようにしたい。
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